3-磷酸甘油酸激酶（PGK）活性檢測(cè)試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào)：BC2250
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存4周，禁止反復(fù)凍融

2. 試劑三：臨用前加入2.5 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存4周，禁止反復(fù)凍融；

3. 試劑四：臨用前加入3 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存4周，禁止反復(fù)凍融；

4. 試劑五：提供一空棕色試劑瓶。臨用前取一支試劑五倒入空瓶中并加入10 mL 蒸餾水充分溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存2周，禁止反復(fù)凍融（該試劑為凍干試劑，可能存在肉眼觀察試劑量相差較大甚至量很少的現(xiàn)象，此現(xiàn)象不影響使用，實(shí)際質(zhì)量相同）；

5. 工作液的配制：按照蒸餾水：試劑一：試劑二：試劑三：試劑四：試劑五=1.14mL：1.5mL：0.06 mL：0.15 mL：0.15 mL：0.6 mL（共3.6mL，4T）的比例配制，根據(jù)樣本量配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
3-磷酸甘油酸激酶（Phosphoglycerate Kinase，PGK，EC.2.7.2.3）是糖酵解的關(guān)鍵酶，也是生物得以生存的關(guān)鍵酶。廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，引起340nm處的吸光度下降，即反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項(xiàng)：

1. ΔA大于0.8或者A1測(cè)定小于0.9時(shí)，建議將粗酶液用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí)，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（10min或15min）或增加樣本體積來測(cè)定。

2. 空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔，正常情況下，變化不超過0.01。

3. 樣本的蛋白濃度需自行測(cè)定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以測(cè)定樣本蛋白濃度時(shí)需扣除提取液自身蛋白濃度。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g白菜加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后再用提取液稀釋4倍，之后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.126-0.654=0.472，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.472-0.002=0.47，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：PGK（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數(shù)= 321.54×0.47÷0.1×4=6044.952 U/g 質(zhì)量。

2. 取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清后再用提取液稀釋20倍，之后按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得計(jì)算，ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定= 0.908-0.35=0.558，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.558-0.002=0.556，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：PGK（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數(shù)= 321.54×0.556÷0.1×20=35755. 248 U/g 質(zhì)量。

3. 取駱駝血清樣本100uL按照測(cè)定步驟直接測(cè)定，測(cè)得計(jì)算，ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定= 0.966-0.907=0.059，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.916-0.914=0.002，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.059-0.002=0.057，按液體體積計(jì)算酶活得：PGK（U/mL）=321.54×ΔA=321.54×0.057=18.328 U/mL。

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