土壤游離氨基酸（S-FAA）含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5090

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑四：臨用前取1瓶加2 mL蒸餾水，充分溶解，用不完的試劑-20℃分裝保存2周；

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg半胱*酸。臨用前加入4.13 mL蒸餾水，得到20 μmol/mL的半胱*酸標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，用不完的試劑可以2-8℃保存4周。

產(chǎn)品說明：

作為土壤中一類重要的化合物，氨基酸占土壤中全氮的15%-60%，是土壤氮素循環(huán)和植物養(yǎng)分供給過程中重要的“庫"和“源"，可通過礦化作用滿足作物氮素營養(yǎng)的需求，也可以被植物直接吸收利用。另外，氨基酸也是土壤微生物重要的氮源，對于土壤微生物群落結(jié)構(gòu)、數(shù)量和活性均有直接影響。因此，研究土壤中氨基酸含量變化規(guī)律，對研究土壤氮素循環(huán)，及其對植物生理生態(tài)變化的影響均有重要意義。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)在570nm有特征吸收峰；通過測定570nm吸光度，來計算氨基酸含量。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

需自備的儀器和用品：

臺式離心機(jī)、可見分光光度計、水浴鍋/金屬浴、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、30-50目篩、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

土樣37℃/自然風(fēng)干后過30-50目篩，稱取約0.15g土樣，加試劑一1mL，振蕩2h，10000rpm離心10min，取上清液，待測。

二、測定步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：取40μL 20μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液加入160μL蒸餾水得4μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3. 操作表：（在EP管中進(jìn)行）

混勻后蓋緊（纏封口膜防止水分散失），100℃反應(yīng)15min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，將測定管8000rpm離心5min后取上清，于570nm測定吸光值，分別記為A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，并計算ΔA測定管=A測定管-A空白管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

標(biāo)準(zhǔn)管、空白管只需做1-2次。

三、S-FAA含量計算

S-FAA含量（μmol/g 土樣）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（V樣÷V樣總×W）

=4×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，4μmol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.2mL；W：土樣質(zhì)量，g；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.2mL；V樣總：樣本總體積，1mL。

注意事項(xiàng)：

1、 試劑四需臨用前配制，且避光保存。

2、 脯*酸和羥脯*酸與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

3、 如果ΔA測定管大于1，建議將樣本用試劑一稀釋后進(jìn)行測定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1、 取0.15g土樣加入1mL試劑一進(jìn)行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得A測定管=0.645、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.745、A空白管=0.052，計算ΔA測定管=A測定管-A空白管=0.645-0.052=0.593，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.745-0.052=0.693，按樣本質(zhì)量計算含量得：

S-FAA（μmol/g土樣）=4×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W=4×0.593÷0.693 ÷0.15=22.819 μmol/g 土樣。

參考文獻(xiàn)：

[1] Wang X, Cui X Y, Guo Y F A study on free amino acid in different forest types soil of cold-temperate forest region[J]. Journal of Nanjing Forestry University (Natural Science Edition), 2016, 59(04): 42-48.

[2] Wang B, Jiang Y Y, Jiao J G, et al. Effects of earthworm on constituent and amount of amino acid in soil[J]. Acta Ecologica Sinica, 2015,35(14):4816-4823.

[3] Zhang X J, Wang W Y, Li W Q, et al. Dynamics of soil dissolved organic nitrogen in alpine meadow[J]. Journal of Lanzhou University: Natural Sciences, 2016, 52(5):623-627.

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