目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>土壤系列>> BC0895-100T/48S土壤過氧化物酶(S-POD)活性檢測試劑盒
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號 | BC0895 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè),綜合 |
主要用途 | 測定意義:S-POD主要來源于土壤微生物,能夠氧化土壤有機物質產生過氧化物,在腐 |
土壤過氧化物酶(S-POD)活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC0895
規(guī)格:100T/48S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體2 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體50 mL×1瓶(自備) | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
試劑一:臨用前加入5.5 mL蒸餾水,用不完的試劑2-8℃保存一周;
試劑四:自備*;
標準品:相當于每1mL*相中含有0.2mg/mL紫色沒食子素。
產品說明:
POD主要來源于土壤微生物,能夠氧化土壤有機物質產生過氧化物,在腐殖質的形成過程中具有重要作用。S-POD催化有機物質氧化成醌,后者在430nm有特征光吸收。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器、0.5mol/L HCl溶液、微量玻璃比色皿/96孔板(非聚苯乙烯材質)、30-50目篩、*(不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干,過30-50目篩。
二、測定步驟
標準品處理:將標準品用0.5 mol/L HCl溶液稀釋至0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0.01、0mg/mL,可參考下表。
序號 | 稀釋前濃度(mg/mL) | 標準液體積(µL) | 0.5 mol/L HCl體積(µL) | 稀釋后濃度(mg/mL) |
1 | 0.2 | 300 | 300 | 0.1 |
2 | 0.1 | 400 | 100 | 0.08 |
3 | 0.1 | 300 | 200 | 0.06 |
4 | 0.1 | 200 | 300 | 0.04 |
5 | 0.1 | 100 | 400 | 0.02 |
6 | 0.1 | 50 | 450 | 0.01 |
7 | - | - | 500 | 0 |
備注:試驗中每個標準管需200µL標準溶液
標曲測定:分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至430nm,0mg/mL管調零,直接測定稀釋后各標準管的吸光度,記為A標準。
3、樣本測定:
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風干土樣(g) | 0.02 | 0.02 |
蒸餾水 | - | 20 |
試劑一(μL) | 100 | 100 |
試劑二(μL) | 20 | - |
振蕩混勻,置于30℃水浴鍋準確反應1 h | ||
試劑三(μL) | 50 | 50 |
試劑四(μL) | 430 | 430 |
振蕩數(shù)次,室溫靜置30min,取0.2mL上層液于430nm 處測定吸光值A,記為A測定管、A對照管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管。(若使用分光光度計則使用試劑四調零)。 注:每個測定管需設一個對照管。 |
三、S-POD活力計算
1、標準曲線的建立
根據標準管的濃度(y,mg/mL)和吸光度A標準(x,A標準),建立標準曲線。根據標準曲線,將ΔA測定(x)帶入公式計算測定中樣本的濃度y值(mg/mL)。
2、S-POD活力計算
單位的定義:每天每g土樣中產生1mg紫色沒食子素定義為一個酶活力單位。
S-POD活力(U/g 土樣)=y×V提取相÷W÷T=516×y
T:反應時間,1h=1/24d;V提取相:提取相總體積,0.43mL;W:樣本質量,0.02g。
參考文獻:
Doxey D L. The use of pyrogallol to demonstrate peroxidase in mammalian blood eosinophils[J]. Stain Technology, 1962, 37(6): 367-371.
Nozaki O, Ji X, Kricka L J. New enhancers for the chemiluminescent peroxidase catalysed chemiluminescent oxidation of pyrogallol and purpurogallin[J]. Journal of bioluminescence and chemiluminescence, 1995, 10(3): 151-156.
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