土壤酸性蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào)：BC0860
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入10 mL試劑六，沸水浴攪拌溶解后待用，用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：20μmol/mL 酪*酸溶液。

產(chǎn)品說明：

土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化，其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。土壤酸性蛋白酶在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。酸性條件下，土壤酸性蛋白酶可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪*酸；在堿性條件下，酪*酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)，在680nm有特征吸收峰。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、臺(tái)式離心機(jī)、研缽、蒸餾水、30-50目篩。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）  
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至680nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：取10μL 20μmol/mL酪*酸標(biāo)準(zhǔn)液，加入990μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.2μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要220μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）

3. 樣本測(cè)定

三、土壤酸性蛋白酶活性計(jì)算
單位定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol的酪*酸為一個(gè)土壤酸性蛋白酶活力單位。
土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)=C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V反總÷W÷T=0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.2μmol/mL；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1d；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項(xiàng)：
當(dāng)吸光值大于1時(shí)，建議將上清液用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)注意乘以稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 分別稱取2份0.1g土樣于1.5mLEP管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.206-0.178=0.028，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：

土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.028÷0.512÷0.1= 0.0547U/g土樣。

1. 分別稱取2份0.1g三葉草土樣于1.5mLEP管中，分別為對(duì)照管及測(cè)定管。按照測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)定吸光度，計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.831-0.612=0.219，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤質(zhì)量計(jì)算酶活得：

土壤酸性蛋白酶(U/g 土樣)= 0.1×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W= 0.1×0.219÷0.512÷0.1=0.0313 U/g土樣。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0270/BC0275 土壤中性*白酶活性檢測(cè)試劑盒
BC0880/BC0885 土壤堿性蛋白酶（S-ALPT）活性檢測(cè)試劑盒

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