蛋白質(zhì)提取試劑核蛋白抽提試劑盒
貨號(hào) ：R0050
規(guī)格 ：50T/100T

產(chǎn)品內(nèi)容 ：

保存 ：核/漿蛋白抽提試劑 4℃保存，PMSF 于-20 ℃保存。

產(chǎn)品簡介：
    本試劑盒提供了一種簡單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提核蛋白的方法。整個(gè)過程只需約 60 分鐘就可以將核蛋白和漿蛋白從細(xì)胞中分離出來。 得到的蛋白可以用于 Western blot 等實(shí)驗(yàn)。 本試劑盒通過漿蛋白抽提試劑使細(xì)胞膨脹破裂，釋放出胞漿蛋白，再通過離心得到細(xì)胞核。然后通過核蛋白抽提試劑抽提得到細(xì)胞核蛋白。本試劑盒可以抽提 50/100 個(gè)樣品（每個(gè)樣品約 2×10 6 個(gè) Hela 細(xì)胞，40mg）。

操作方法 ：
    裂解蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。
    一 、 對(duì)于體外培養(yǎng)細(xì)胞 ：
    1．根據(jù)用量取適當(dāng)?shù)臐{蛋白抽提試劑和核蛋白抽提試劑加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。PMSF需現(xiàn)用現(xiàn)加，若目標(biāo)蛋白含有豐富的半胱氨酸，可以在兩種蛋白抽提液中加入 DTT 終濃度 0.5mM。
    2．對(duì)于貼壁細(xì)胞，去除培養(yǎng)液，用 PBS 洗一遍，用細(xì)胞刮刀收集細(xì)胞，或用 EDTA 消化后吹打下細(xì)胞（好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白） 。500 g 離心 2～3 分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清留下沉淀備用。
    3．對(duì)于懸浮細(xì)胞：用 PBS 洗一遍，500 g 離心 2～3 分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，留下細(xì)胞沉淀備用。
    4．每 20ul 細(xì)胞沉淀加入 200ul 漿蛋白抽提試劑（2×10 6 個(gè)細(xì)胞沉淀約 20ul 或 40mg） 。
    5．用移液器吹打或高速渦旋 15 秒（可適當(dāng)延長） ，必須使細(xì)胞沉淀*分散開成單細(xì)胞懸液。細(xì)胞沉淀分散不*會(huì)導(dǎo)致蛋白產(chǎn)量降低。
    6．冰浴 10 分鐘。
    7．高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋 10 秒，4℃ 12000～16000g 離心 10 分鐘。
    8．上清即為抽提得到的細(xì)胞漿蛋白，立即吸取上清預(yù)冷的樣品管中備用，進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 等實(shí)驗(yàn)，但蛋白濃度較低，可根據(jù)需要進(jìn)行相應(yīng)濃縮。
    9．沉淀即為細(xì)胞核，要*吸盡殘余的上清（避免細(xì)胞漿蛋白的污染） ，加入 50-100ul 核蛋白抽提試劑。
   10．用移液器吹打或高速渦旋 15 秒（可適當(dāng)延長）沉淀*分散，冰浴 10 分鐘。
   11．高轉(zhuǎn)速劇烈渦旋 10 秒，4℃12000～16000g 離心 10 分鐘。
   12．立即吸取上清預(yù)冷的樣品管中，此即為抽提得到的細(xì)胞核蛋白?？蛇M(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)或-70℃凍存。

對(duì)于組織樣品：
    把組織稱重后，盡可能切成非常細(xì)小的碎片，按每 50mg 組織加入 200ul-500ul PBS，用勻漿器冰上勻漿制成細(xì)胞懸液，500 g 離心 2～3 分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清，收集沉淀。加入 200ul 漿蛋白抽提試劑后接上述步驟 5。

注意事項(xiàng) ：
    1．裂解得到的蛋白樣品，由于含有較高濃度的去垢劑干擾，不能用 Bradford 法測定蛋白濃度，可以選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白定量試劑盒(貨號(hào) PC0020)測定蛋白濃度。
    2．對(duì)于組織樣品，本試劑盒適用于新鮮組織，對(duì)凍存組織抽提效果較差。
    3．為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

相關(guān)產(chǎn)品 ：

P1020  1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
P1010  4× 蛋白上樣緩沖液（含 β- 巰基乙醇）
S1010  10% SDS
PR1400  低分子量蛋白 MARKER
PC002  BCA 法蛋白濃度測定試劑盒
PC0030 Lowry 法蛋白濃度測定試劑盒

蛋白質(zhì)提取試劑核蛋白抽提試劑盒訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

蛋白質(zhì)提取試劑核蛋白抽提試劑盒運(yùn)輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。