Western blotting ECL Plus熒光檢測(cè)試劑（ECL超敏發(fā)光液）
貨號(hào) ：PE0010 
規(guī)格 ：25ml/100ml
保存 ：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室溫放置數(shù)月不影響質(zhì)量。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 ：
    ECL Plus 超敏發(fā)光液直接或間接檢測(cè)與辣根過氧化物酶 HRP 關(guān)聯(lián)的蛋白或核酸底物。這一*的發(fā)光底物系統(tǒng)是目前靈敏的商業(yè)化熒光 ECL 檢測(cè)試劑，具有靈敏度和高信噪比，可檢測(cè)出 10-100 fg 的微量抗原；發(fā)光迅速，熒光可使 X 感光膠片感光達(dá) 12 小時(shí)以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測(cè)。同時(shí)該試劑允許使用更高的抗體稀釋倍數(shù)（1：2000-1：10000），極其節(jié)省抗體。
用途：用于 HRP 標(biāo)記抗體的 Western Blot 和 HRP 標(biāo)記探針的核酸雜交。
安全性：無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

    經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。Western blotting 檢測(cè)系統(tǒng)除需要過氧化物酶標(biāo)記的各種二抗外，還需要配套的顯色試劑。索萊寶提供DAB顯色和ECL化學(xué)發(fā)光兩種試劑及相應(yīng)試劑盒。

使用方法 ：
    1、常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP 標(biāo)記抗體或核酸探針孵育、洗膜。注意用 HRP 標(biāo)記 IgG 或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP 夾心法。核酸雜交膜用 HRP 標(biāo)記探針雜交，洗膜。
    2、在洗滌膜上的 HRP 標(biāo)記二抗的同時(shí)，新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液 A 和 B 混合，放置使之恢復(fù)室溫否則會(huì)減弱熒光強(qiáng)度。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有減低。
    3、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜*干燥。將膜*浸入并與發(fā)光工作液充分接觸（約0.125ml 發(fā)光工作液/cm 2 膜）。室溫孵育 3 分鐘后立即壓片曝光。孵育時(shí)間過長不會(huì)增加靈敏度，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利于反應(yīng)進(jìn)行，也會(huì)導(dǎo)致膜上條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
    4、用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
    5、在 X 光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來*包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，好蛋白帶面向上。
    6、在黑暗中放入 X 感光膠片，分別曝光不同的時(shí)間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
 

注意事項(xiàng) ：
    1、步驟 1-5 可在日光燈下操作；但發(fā)光液暴露于強(qiáng)光下時(shí)間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的潔凈。
    2、長時(shí)間曝光或蛋白質(zhì)過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
    3、 發(fā)光工作液孵育約 3 分鐘后膜上的條帶發(fā)光。 強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見， 低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱，肉眼雖不可見但能使 X 膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時(shí)間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時(shí)并使 X 膠片感光，因而弱帶可曝光 1-10 小時(shí)。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用 ECL 發(fā)光和曝光。
    4、 由于超敏發(fā)光液的高靈敏度， 強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗 1： 1000-1： 4000， 二抗 1： 2000-1：5000?？贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失??！
    5、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時(shí)會(huì)淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜，例如“克林萊”牌保鮮膜。
   6、 使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白 Marker 和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可幫助確定膠片上條帶的準(zhǔn)確位置和大小。
   7、NaN3 能抑制 HRP 活性，回收二抗時(shí)應(yīng)避免使用 NaN3，如必需使用勿超過 0.01%。 
 

相關(guān)產(chǎn)品 ：

P1020  1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
P1010  4× 蛋白上樣緩沖液（含 β- 巰基乙醇）
P1300  SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
PR1700 預(yù)染次高分子量蛋白 MARKER
T1070  5×Tris- 甘氨酸電泳緩沖液
D1060  10× 電泳轉(zhuǎn)移緩沖液
SW3010 膜封閉液
SW3020 膜再生液

Western blotting ECL Plus熒光檢測(cè)試劑（ECL超敏發(fā)光液）訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

Western blotting ECL Plus熒光檢測(cè)試劑（ECL超敏發(fā)光液）運(yùn)輸說明：

1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。