細胞培養(yǎng)試劑凋亡檢測試劑盒ANNEXIN V-FITC/PI

貨號 ：CA1020
規(guī)格 ：20T/50T/100T
保存 ：貯存于 2-8°C，復(fù)檢期為一年。建議 Annexin V-FITC 打開后，分裝成小份凍存于-20°C。

產(chǎn)品說明 ：
    細胞凋亡是細胞的基本特征之一，在機體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要的作用。 Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca 2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白， 能與細胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V 結(jié)合到凋亡細胞后，在藍色光的激發(fā)下，發(fā)出綠色熒光，區(qū)分出凋亡細胞與正常細胞。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）是一種核酸染料，
    它不能穿透完整細胞膜，但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透，并使細胞核紅染。將FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區(qū)分開來。
 

操作步驟:

1. 調(diào)整待測細胞的濃度為 5×10 5 -1×10 6 個/ml。
2. 取 1ml 細胞，1000rpm，4℃離心 10 分鐘，棄上清。
3. 加入 1ml 預(yù)冷的 PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000rpm，4℃離心 10 分鐘，棄上清（對于貼壁細胞，先用胰酶消化，再用 PBS 洗滌） 。
4. 重復(fù)步驟 3 兩次。
5. 將細胞重懸于 200µl Binding Buffer。
6. 加入 10µl Annexin V-FITC 和 10µl PI，輕輕混勻，避光室溫反應(yīng) 15 分鐘 或 4℃反應(yīng) 30 分鐘。
7. 加入 300µl Binding Buffer，在 1 小時內(nèi)用流式細胞儀檢測。
8. 若用熒光顯微鏡檢測，將細胞混合液離心，取細胞沉淀涂片，再進行觀察。

注意事項:
    為保證得到理想的實驗結(jié)果在使用此試劑盒之前請認真閱讀該注意事項。
    1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩管底，避免開蓋時液體灑落。
    2.Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì)，在保存與操作時請注意避光。
    3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。
    4.在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免 PBS 殘留影響實驗結(jié)果。
    5.PI 染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首行 Annexin V-FITC 染色，上機前 5 分鐘再加入 PI 染色。

    6.整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在 4℃下操作。
    7.反應(yīng)完畢后請盡快檢測，因為細胞凋亡是一個動態(tài)的過程，反應(yīng) 1 小時后熒光強度就開始衰變。
    8.成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細胞類型、細胞膜上 PS 的密度、發(fā)生凋亡時 PS 翻轉(zhuǎn)的比例、誘導(dǎo)細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導(dǎo)凋亡的時間等，把這些影響因素進行優(yōu)化對實驗成功是非常必要的。
     此試劑盒僅供科研使用。

相關(guān)產(chǎn)品 ：

P1020 1×PBS ， PH7.2-7.4 ， 0.01M
T1300 胰蛋白酶－ EDTA 消化液 (0.25%) 不含酚紅
T1350 胰蛋白酶消化液 (0.25%) 不含酚紅
24800 通用細胞凍存液
12100  DMEM(H)
31800  RPMI Medium 1640
CA1040 一步法 TUNEL 細胞凋亡檢測試劑盒 (FITC)
S1056 細胞凋亡熒光 Hoechst 33342-PI 雙染試劑盒

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1、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達您的手中。