谷胱甘肽 S- 轉(zhuǎn)移酶（GST）活性測定試劑盒
說明書
貨號：BC0350
規(guī)格：50 管/48 樣
產(chǎn)品簡介：
谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)硫酶（GST）是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST 是體
內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與谷胱甘肽巰基的共價結(jié)合，使親電
化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外
的目的。因此，GST 在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因為 GST 具
有 GSH-Px 活性，亦稱為 non-SeGSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如 DNA、蛋白質(zhì)等的功能。
GST 催化 GSH 與 CDNB 結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長為 340nm，通過測定 340nm 波長處吸光度
上升速率，即可計算出 GST 活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外-可見分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1ml 石英比色皿、雙蒸水
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：試劑一×1 支，用前充分溶解于 100ml 雙蒸水中，4℃保存 3 個月
試劑二：粉劑二×1 支；稀釋液二×1 管，用前將稀釋液二加入粉劑二中充分溶解后加雙蒸水 5.0ml，
4℃保存 3 個月
試劑三：粉劑三×1 支，4℃保存 3 個月，臨用前加試劑一 5.0ml 充分溶解，臨用前配制。
操作步驟：
一、樣品測定的準(zhǔn)備：
稱約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心 10min，取上清(如上清不清澈，再離
心 3min)。
二、GST  測定操作
1、 混合試劑配制：將試劑二與試劑一按 1：8 混合
2、 試劑三放在 25℃預(yù)溫
3、 分光光度計調(diào)到 340nm 處，設(shè)定時間為 5min，用雙蒸水調(diào)零
4、 取 0.1ml 樣品與 0.9ml 混合液混合，于 25℃預(yù)溫 5min，再加入試劑三 0.1ml，迅速混勻，于 340nm 處
測定 5min 內(nèi)吸光值的變化,第 0s 的吸光值記為 A1，第 300s 的吸光值記為 A2
5、 空白管測定為操作 4 中以 0.1ml 試劑一代替 0.1ml 樣品液
酶活計算：
一、 血液 GST  活性計算
1、 GST 活力單位定義： 在 25℃下， 每 ml 血液每分鐘催化 1μmol/L CDNB 與 GSH 結(jié)合的 GST 酶量為 1U。
2、 計算公式：
GST（U/ml）=ΔA 340 /min×〔10 6 / (ε·d) 〕×（V總/V樣）=ΔA /min×10 6 / (9.6×10
3 ×1) 〕×1.1/0.1
340
=ΔA /min×1145.83
340
△A 340 =△A 測定管 -△A 空白管 ，△A 測定管 與△A 空白管 均等于（A2-A1）/5，即每分鐘吸光值變化
3 mol/L • cm
ε：產(chǎn)物在 340nm處摩爾吸光系數(shù)為 9.6×10
10 6 ：摩爾分子換算成微摩爾分子
d ：比色杯光徑（cm）
V 總：反應(yīng)總體積（ml）
V 樣：所用樣品體積（ml）
二、  組織 GST  活性計算
1、 GST 活力單位定義：在 25℃下，每毫克蛋白每分鐘催化 1μmol/L CDNB 與 GSH 結(jié)合的 GST 酶量為
1U。
2、 計算公式：
GST（U/mg）=△A 340 /min×[10 6 / (ε •d)]×(V總/V 樣)÷Cpr =△A 340 /min×10 6 /(9.6×10 3 ×1)×1.1/0.1÷Cpr
=△A 340 /min×1145.83÷Cpr
△A 340 =△A 測定管 -△A 空白管 ，△A 測定管 與△A 空白管 均等于（A2-A1）/5，即每分鐘吸光值變化
3  mol/L • cm
ε：產(chǎn)物在 340nm處摩爾吸光系數(shù)為 9.6×10
10 6 ：摩爾分子換算成微摩爾分子
d：比色杯光徑（cm）
V 總：反應(yīng)總體積（ml）
V 樣：所用樣品體積（ml）
Cpr：蛋白濃度（mg/ml）
注意事項：
a) 樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行，且須在當(dāng)日測定酶活力
b) 本法測定 GST 活性的線性范圍可達(dá) 76U/L，測定前先用 1～2 個樣做預(yù)實驗，如 5min 內(nèi)反應(yīng)不成線性，
須對樣品做相應(yīng)稀釋，稀釋時用樣品提取液稀釋，計算結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
c) 測定反映的溫度對測定結(jié)果有影響，請控制在 25℃
不同測定材料中 GST  酶液提取的注意事項
哺乳動物溶血液的配制：
①取肝素抗凝全血(人)20μL，以蒸餾水稀釋 1mL，配成 1：49 的溶血液；取肝素抗凝全血(鼠)10μL 加
蒸餾水 1mL，配成 1：99 的溶血液。
②充分混勻，放置 5 分鐘直使玻璃管中的溶血液對光呈*透明狀，方可進(jìn)行檢測。
③已配好的溶血液中酶活力只能保持 45-60 分鐘，天冷時可延遲 120 分鐘。如果當(dāng)天來不及測定則以抗
凝全血冰箱（4-8℃）保存，2-3 天內(nèi)酶活力變化不大。
哺乳動物組織中 GST 的提?。河捎诓溉閯游锝M織中酶活力較大，為保證靈敏度，要注意用試劑一將酶提取
液進(jìn)行稀釋，肝臟稀釋 50 倍左右，腎臟稀釋 20 倍左右。計算酶活力時乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
細(xì)胞處理：收集約 2× 10
4 個細(xì)胞，冷凍干燥后，加入 1 mL 試劑一。超聲破壁細(xì)胞(950 W，30%，15 min，
工作 1 s間隔 2 s)，再經(jīng) 1,0000r 4℃高速離心 10 min，上清待測。
其它步驟按照試劑盒說明書操作即可。

谷胱甘肽 S- 轉(zhuǎn)移酶（GST）活性測定試劑盒