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BC0360-β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè) 糖代謝
  • BC0360-β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè) 糖代謝
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貨物所在地:北京北京市

地: 北京

更新時(shí)間:2024-08-12 21:00:06

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β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè) 糖代謝
β-1,3-GA水解昆布多糖,內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵,產(chǎn)生還原末端,通過(guò)測(cè)定還原糖生成速率來(lái)計(jì)算其酶活性。

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè) 糖代謝
貨號(hào):BC0360
規(guī)格:50管/24樣 
測(cè)試方法:可見(jiàn)分光光度法

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體50mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入3mL 蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存;

試劑二:液體42mL×1 瓶,4℃保存;

標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1支,4℃保存,含10mg無(wú)水葡萄糖(干燥失重<0.2%),臨用前加入1ml蒸餾水溶解,配制成10mg/ml葡萄糖溶液備用,4℃可保存1周,或者用飽和苯甲酸溶液溶解,可保存更長(zhǎng)時(shí)間。

標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

 

產(chǎn)品說(shuō)明:

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下,可誘導(dǎo)細(xì)胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA 活性測(cè)定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究。

β-1,3-GA 水解昆布多糖,內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵,產(chǎn)生還原末端,通過(guò)測(cè)定還原糖生成速率,來(lái)計(jì)算其酶活性。

 

自備儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸

餾水。

 

操作步驟:

粗酶液提?。?/strong>

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約0.1g 組織,加入1mL

提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

 

測(cè)定步驟:

  • 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)540nm,蒸餾水調(diào)零。
  • 樣本測(cè)定(在1.5mL EP 管中依次加入下列試劑):

試劑名稱(chēng)(μL)

測(cè)定管

對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)管(葡萄糖溶液)

樣本或標(biāo)準(zhǔn)液

100

100

100

蒸餾水

 

100

100

試劑一

100

 

 

充分混勻,放入37℃水浴60min。

試劑二

600

600

600

充分混勻,沸水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻,540nm 處記錄各管吸光值A(chǔ),

如果吸光值大于2,可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定(計(jì)算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)),ΔA=A 測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

 

β-1,3-GA 活性計(jì)算:

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度(x)和濃度(y,mg/ml)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA帶入公式中計(jì)算出樣品中產(chǎn)生的還原糖的含量y值(mg/ml)

  • 按蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg 組織蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

  • 按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g 組織每小時(shí)產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

β-1,3-GA(U /g 鮮重)=(V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)胞或細(xì)菌每小時(shí)產(chǎn)生1mg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

β-1,3-GA(U /g 鮮重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。

 

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測(cè) 糖代謝訂購(gòu)說(shuō)明:

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。 
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。


 

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