β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測 糖代謝
貨號：BC0360
規(guī)格：50管/24樣 
測試方法：可見分光光度法

產品內容：

提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入3mL 蒸餾水，充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；

試劑二：液體42mL×1 瓶，4℃保存；

標準品：粉劑×1支，4℃保存，含10mg無水葡萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入1ml蒸餾水溶解，配制成10mg/ml葡萄糖溶液備用，4℃可保存1周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，可保存更長時間。

標準品準備：將標準品用蒸餾水稀釋1、0.8、0.6、0.4、0.2mg/ml。

產品說明：

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下，可誘導細胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應用于植物病理和逆境生理研究。

β-1,3-GA 水解昆布多糖，內切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產生還原末端，通過測定還原糖生成速率，來計算其酶活性。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸

餾水。

操作步驟：

粗酶液提?。?/strong>

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g 組織，加入1mL

提取液），進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

• 分光光度計預熱30min 以上，調節(jié)波長540nm，蒸餾水調零。
• 樣本測定（在1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）：

充分混勻，沸水浴5min（蓋緊，防止水分散失），流水冷卻，540nm 處記錄各管吸光值A，

如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式乘以相應稀釋倍數），ΔA=A 測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。

β-1,3-GA 活性計算：

根據標準管吸光度（x）和濃度（y，mg/ml）建立標準曲線，將ΔA帶入公式中計算出樣品中產生的還原糖的含量y值（mg/ml）

• 按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg 組織蛋白每小時產生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y ÷Cpr

• 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每小時產生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(U /g 鮮重)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)=y ÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每1萬個細胞或細菌每小時產生1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(U /g 鮮重)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)=0.002×y

V1：加入反應體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測 糖代謝訂購說明：

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