NADP蘋(píng)果酸酶（NADP-ME）測(cè)試盒 輔酶系列

產(chǎn)品名稱：NADP蘋(píng)果酸酶(NADP-ME)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品英文名： NADP Malic Enzyme(NADP-ME) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC1120         產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣         產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：420
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字：NADP蘋(píng)果酸酶試劑盒|活性檢測(cè)試劑盒|NADP-ME活性檢測(cè)|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹：
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙tong酸和 CO2，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋(píng)果酸代謝 的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物 ME 活性測(cè)定較多，已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH，在 340nm 下測(cè)定 NADPH 增加速率。

產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 70mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 20mL 提取液充分溶解備用；
試劑三：粉劑×2 支，4℃保存；用時(shí)每支加 1mL 雙蒸水充分溶解備用；
試劑四：粉劑×2 支，-20℃保存；用時(shí)每支加 500μL 雙蒸水充分溶解備用。
工作液：在 15mL 試劑二中加入 2mL 試劑三和 1mL 試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配。 產(chǎn)品說(shuō)明：
ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙tong酸和 CO2，以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋(píng)果酸代謝 的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物 ME 活性測(cè)定較多，已經(jīng)成為抗氧 化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對(duì)底物特異性的不同，可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH，在 340nm 下測(cè)定 NADPH 增加速率。 
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑： 紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 石英比色皿、勻漿器和蒸餾水 

操作步驟： 

• 粗酶液提取：

細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備： 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取 液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率 20％，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）。8000g 4℃離心 10min， 取上清，置冰上待測(cè)。
組織：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置 冰上待測(cè)。 血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

• 測(cè)定步驟：
• 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng) 340nm，蒸餾水調(diào)零。
• 將試劑一在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）中保溫 15min 左右。
• 操作表：

將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中，混勻后在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）， 340 nm 波長(zhǎng)下記錄初始吸光度 A1 和反應(yīng) 1min 后的吸光度 A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意事項(xiàng)：

1. 若 A2-A1 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，使 A2-A1 小于 0.5，可提高檢測(cè)靈敏度。
2. 實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一 37℃或 25℃水浴放置。
3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持 37℃或 25℃，取小燒杯一只裝入一定量的 37℃或 25℃蒸餾水， 將此燒杯放入 37℃或 25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4. 兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
5. 如果ΔA＜0.01，可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)到 5 分鐘或 10 分鐘。

• NADP-ME 活性計(jì)算：
• 組織中 NADP-ME 活力的計(jì)算：
• 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =4823×ΔA÷W

1. 細(xì)菌或細(xì)胞中 NADP-ME 活力的計(jì)算：
2. 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr

1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力 單位。
NADP-ME（U/10 4 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=9.65×ΔA。

1. 血清中 NADP-ME 活力的計(jì)算：

單位的定義：每 mL 血清在反應(yīng)體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。
NADP-ME（U/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10 9]÷V 樣÷T =4823×ΔA。 V 反總：反應(yīng)體系總體積，9×10 -4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10 3L/mol/cm；d：比色 皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間， 1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬(wàn)。

相關(guān)文獻(xiàn)：
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu， Pengsong Li，Lei Zhang， Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809

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