上海研謹(jǐn)生物科技有限公司

用超聲波破碎儀破碎大腸桿菌注意事項(xiàng)

時(shí)間:2018-8-10閱讀:4551
分享:

用超聲波破碎儀破碎大腸桿菌注意事項(xiàng)


用大腸桿菌表達(dá)外源蛋白,在進(jìn)行超聲波破碎之前,用含有1%triton-X-100的PBS懸浮,效果較好,1%triton-X-100的作用還是很明顯的,對(duì)其他的一些細(xì)菌同樣起作用,比如鏈霉菌。 
細(xì)菌沉淀直接加樣品1 buffer,再加5μl的巰基乙醇,混勻,離心,煮沸10min,直接上樣,染色脫色步驟如下:將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當(dāng)補(bǔ)點(diǎn)醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min 就可以。在表達(dá)重組蛋白后超聲波破碎細(xì)胞,采用冰浴,400w,破2s停1s,但是不一會(huì)就產(chǎn)生大量泡沫,影響了破碎功率, pbs和tris緩沖液都是這樣,后都是破碎不*,而我的目的蛋白就在這些未破碎的細(xì)胞中。
1*會(huì)產(chǎn)生氣泡是因?yàn)槟愕奶筋^位置沒放好。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部,約1cm(推薦是距底部0.5mm)。功率根據(jù)儀器不同會(huì)有所不同,但你可以觀察液面,有波動(dòng)但不要太劇烈就好。
2*破3s停10s,破碎20-30個(gè)循環(huán)觀察效果。 
3*探頭位置擺放也要注意,聽聲音如果不對(duì)的話就要及時(shí)調(diào)整。另外可以從菌濃度方面考慮。 在超聲波破碎時(shí)試著加大體積,振幅盡量不要超過60%. 
4*嘗試超8s停8s,對(duì)有些菌體蛋白來說,通常方法很難散熱,導(dǎo)致蛋白變性產(chǎn)生氣泡,停頓時(shí)間稍長一些,這種情況多見于包涵體形式的蛋白。如果換用Branson超聲波破碎儀來進(jìn)行工作,由于熱耗較小,停頓周期可適當(dāng)減小。

細(xì)胞的衰老         細(xì)胞間連接

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。

溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn),建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

撥打電話
在線留言