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探索抗體蛋白的質(zhì)控奧秘|疏水作用色譜柱,讓藥物分析更高效

閱讀:165      發(fā)布時(shí)間:2024-6-24
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疏水相互作用色譜

 

疏水相互作用色譜 (Hydrophobic Interaction Chromatography,簡(jiǎn)稱HIC) 是一種蛋白質(zhì)分離、純化和表征的傳統(tǒng)技術(shù)。近些年來(lái),隨著單克隆抗體、雙抗、三抗以及抗體偶聯(lián)藥物 (ADC) 的不斷發(fā)展,HIC 在抗體以及抗體偶聯(lián)藥物的表征與分析上應(yīng)用越來(lái)越廣泛。


疏水作用色譜的方法開發(fā)


疏水作用色譜的方法開發(fā)一方面是色譜柱的選擇,一方面是方法的優(yōu)化。

 

與其他技術(shù)不同,疏水作用色譜技術(shù)允許蛋白質(zhì)在非變性條件下保持天然結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。利用抗體蛋白類藥物疏水相互作用色譜根據(jù)疏水性的不同進(jìn)行分離。

色譜柱選擇方面,疏水作用色譜柱的填料基質(zhì)和鍵合相都可以影響選擇性。對(duì)于填料基質(zhì)而言,常見的HIC色譜柱既有硅膠基質(zhì)的,也有聚合物基質(zhì)。而鍵合相的差異,則主要影響疏水性,常見鍵合相的疏水性從弱到強(qiáng)依次是:丁基<辛基<苯基。

方法優(yōu)化方面,疏水相互作用色譜一般是運(yùn)行鹽梯度。高濃度的緩沖鹽,由于“占據(jù)水分子"導(dǎo)致蛋白質(zhì)疏水內(nèi)核發(fā)生翻轉(zhuǎn),疏水殘基暴露出來(lái),與鍵合相相互作用,而緩沖鹽濃度降低的時(shí)候,疏水殘基可逆的進(jìn)行翻轉(zhuǎn),疏水作用減弱,從而洗脫。蛋白質(zhì)分子按其疏水性大小被依次洗脫出來(lái),疏水性小的先流出。具體的方法受到離子強(qiáng)度、溶劑種類、溫度以及pH值的影響。


聚合物無(wú)孔HIC色譜柱

 

Shim-pack Bio HIC可用在低壓力下實(shí)現(xiàn)ADC的DAR高分辨率分析。

 

圖片

ADC藥物DAR分析

檢測(cè)條件

系統(tǒng): Inert LC(1.6 mL混合器)

工作站: LabSolutions™ LC/GC

色譜柱: Shim-pack Bio HIC (100mm.x 4.6 mmI.D., 4µm)

流動(dòng)相:

A) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4(pH 7.0)含有1.5M(NH4)2SO4/2-丙醇(95/5)

B) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4(pH 7.0)/2-丙醇(80/20)

梯度: 0%B (0-1min), 0-100%B (1-18min), 100%B (18-23min)

流速: 1.0mL/min

進(jìn)樣量: 5µL

柱溫: 25°C

檢測(cè)器: 280nm (PDA)

樣品: Cysteine-liked ADC Mimic (5 mg/mL)

Peak area reproducibility(n = 6)

 

image.png

峰使用i-peak finder(LabSolutions的峰值積分算法)自動(dòng)進(jìn)行積分。


產(chǎn)品信息

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