疏水相互作用色譜
疏水相互作用色譜 (Hydrophobic Interaction Chromatography，簡稱HIC) 是一種蛋白質分離、純化和表征的傳統(tǒng)技術。近些年來，隨著單克隆抗體、雙抗、三抗以及抗體偶聯(lián)藥物 (ADC) 的不斷發(fā)展，HIC 在抗體以及抗體偶聯(lián)藥物的表征與分析上應用越來越廣泛。
疏水作用色譜的方法開發(fā)
疏水作用色譜的方法開發(fā)一方面是色譜柱的選擇，一方面是方法的優(yōu)化。
與其他技術不同，疏水作用色譜技術允許蛋白質在非變性條件下保持天然結構進行分析。利用抗體蛋白類藥物疏水相互作用色譜根據(jù)疏水性的不同進行分離。
色譜柱選擇方面，疏水作用色譜柱的填料基質和鍵合相都可以影響選擇性。對于填料基質而言，常見的HIC色譜柱既有硅膠基質的，也有聚合物基質。而鍵合相的差異，則主要影響疏水性，常見鍵合相的疏水性從弱到強依次是：丁基<辛基<苯基。
方法優(yōu)化方面，疏水相互作用色譜一般是運行鹽梯度。高濃度的緩沖鹽，由于“占據(jù)水分子"導致蛋白質疏水內(nèi)核發(fā)生翻轉，疏水殘基暴露出來，與鍵合相相互作用，而緩沖鹽濃度降低的時候，疏水殘基可逆的進行翻轉，疏水作用減弱，從而洗脫。蛋白質分子按其疏水性大小被依次洗脫出來，疏水性小的先流出。具體的方法受到離子強度、溶劑種類、溫度以及pH值的影響。
聚合物無孔HIC色譜柱
Shim-pack Bio HIC可用在低壓力下實現(xiàn)ADC的DAR高分辨率分析。
ADC藥物DAR分析
檢測條件
系統(tǒng): Inert LC（1.6 mL混合器）
工作站: LabSolutions™ LC/GC
色譜柱: Shim-pack Bio HIC (100mm.x 4.6 mmI.D., 4µm)
流動相:
A) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4（pH 7.0）含有1.5M（NH4）2SO4/2-丙醇（95/5）
B) 50mM NaH2PO4-Na2HPO4（pH 7.0）/2-丙醇（80/20）
梯度: 0%B (0-1min), 0-100%B (1-18min), 100%B (18-23min)
流速: 1.0mL/min
進樣量: 5µL
柱溫: 25°C
檢測器: 280nm (PDA)
樣品: Cysteine-liked ADC Mimic (5 mg/mL)
Peak area reproducibility（n = 6）
峰使用i-peak finder（LabSolutions的峰值積分算法）自動進行積分。
產(chǎn)品信息
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