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我們知道,能夠用作ELISA測定的標(biāo)本很廣泛,包含了體液、分泌物和排泄物等,均可作標(biāo)本以測定其間某種抗體或抗原成份。這些標(biāo)本搜集的時間、辦法和保存都有一定的要求。今日研域(上海)為您解說:ELISA操作嚴(yán)格要求定當(dāng)做出好試驗(yàn)。
按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備試驗(yàn)中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水,包含用于洗刷的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計丈量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運(yùn)用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
洗板辦法:
① 手工洗板,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在試驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將引薦的洗刷緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
② 自動洗板,如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在嫻熟運(yùn)用后再用到正式試驗(yàn)過程中。
試劑盒的配制:關(guān)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地回收其間的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。一般待測抗原規(guī)范曲線的線性規(guī)模的可通過將規(guī)范品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml??衫靡?guī)范的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改動酶底物體系可在一定規(guī)模內(nèi)提高靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度,建議孵育規(guī)范品和標(biāo)本。若運(yùn)用過氧化物酶作為顯色體系,應(yīng)禁止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
試劑盒的操作因固相載體的構(gòu)成不同而有所差異,國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。
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