酶標(biāo)記抗體法標(biāo)記抗體的制備

酶標(biāo)記抗體法（enzaymelabelledantibodytechnique）是用結(jié)合物將酶結(jié)合在抗體分子上，制備成酶標(biāo)記抗體，通過(guò)抗原—抗體反應(yīng)使抗原—抗體復(fù)合物上帶有酶分子，再借助酶對(duì)底物的特異性催化作用，在抗原—抗體反應(yīng)部位形成不溶性有色產(chǎn)物，用于研究抗原物質(zhì)分布和性質(zhì)。酶標(biāo)記抗體法又分為直接法和間接法， 目前應(yīng)用zui多的酶是辣根過(guò)氧化酶（HRP），底物是3，3’—二氨基聯(lián)苯胺（DAB）。
 

抗體蛋白分子與酶分子（如HRP或AKP）以一定的方式相互交換，形成酶標(biāo)記抗體，故稱酶標(biāo)抗體或酶聯(lián)抗體，它是IHC酶標(biāo)記抗體法的主要試劑，其質(zhì)量好壞將直接影響到方法的敏感性和特異性。HRP可以以共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵方式黏附在其他的蛋白質(zhì)分子上，常見的標(biāo)記方法有戊二醛一步法和二步法，也可以用過(guò)碘酸鈉氧化法，它們主要為共價(jià)鍵結(jié)合方式（反應(yīng)式見圖4—2和圖4—3）；

另一種非共價(jià)鍵結(jié)合方式是用4，4’—二氟—3，3，—二硝基苯基砜（4，4／—difluoro-3，3，—dinitrophenylsulfone，F(xiàn)NPS）作為交聯(lián)試劑，該方法不常用。戊二醛二步法的標(biāo)記效率要高于一步法，過(guò)碘酸鈉氧化法要高于戊二醛二步法。其主要原理是二種蛋白質(zhì)分子的賴氨酸上的e基團(tuán)和含氨基的N端經(jīng)活化劑活化而結(jié)合。由于抗體和酶分子上所具有的反應(yīng)基團(tuán)很少，需通過(guò)功能基團(tuán)（如戊二醛）將更多的抗體和酶分子結(jié)合在一起，酶分子首先和雙功能試劑結(jié)合，再與抗體分子結(jié)合。這樣可以結(jié)合更多的酶和抗體，而且無(wú)聚合物產(chǎn)生。HRP還可以與生物素和親和素結(jié)合。
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