人ELISA試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF）含量。實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF）水平。用純化的人血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF），再與 HRP標記的血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。 TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標準曲線計算樣品中人血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF）濃度。試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶
7
終止液 6ml×1瓶
2
酶標試劑 6ml×1瓶
8
標準品（2400pg/ml） 0.5ml×1瓶
3
酶標包被板 12孔 × 8條
9
標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液 6ml×1瓶
10
說明書 1份
5
顯色劑 A液 6ml×1瓶
11
封板膜 2張
6
顯色劑 B液 6ml×1/瓶
12
密封袋 1個

人ELISA試劑盒標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)）。
11.測定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應(yīng)在加終止