血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中水平。用純化的大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)，再與HRP標(biāo)記的肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)濃度。

血漿及相關(guān)液體樣本中大鼠試劑盒組成

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

3．組織處理：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
3. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
6. 溫育：操作同3。
7. 洗滌：操作同5。
8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。
10. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。