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1529次傳統(tǒng)的二維細胞培養(yǎng)并不是細胞生長的天然狀態(tài),因而細胞的基因表達、信號轉(zhuǎn)導和形態(tài)學都可能與天然有異。為了避免這些影響,研究人員一直在利用蛋白凝膠和生物反應器來開發(fā)三維的細胞培養(yǎng)基技術。zui近,美國萊斯大學和德克薩斯大學M.D. Anderson癌癥中心的研究人員闡明了一種更為簡單的三維培養(yǎng)技術,
研究小組開發(fā)出一種生物裝配器(bioassembler)。這個系統(tǒng)使用磁力讓細胞懸浮,并促使細胞生長成三維的形狀。懸浮過程是基于一種生物無機的水凝膠(hydrogel),這種水凝膠由三部分組成:噬菌體、磁性氧化鐵和金納米顆粒。研究小組使用的噬菌體是M13來源的,展示了RGD-4C配體肽段,以靶定金納米顆粒和磁性氧化鐵。這種基于磁性環(huán)的技術與所有標準的培養(yǎng)技術兼容,因此可推廣到大部分實驗室。
為了構建培養(yǎng)系統(tǒng),研究人員在包含細胞的水凝膠中加入了納米顆粒和噬菌體。由于噬菌體上表達了配體肽段,它就能靶定納米顆粒。當噬菌體感染細胞,也就將納米顆粒運輸?shù)郊毎麅?nèi)。研究人員隨后洗掉凝膠,在充滿基質(zhì)的Petri dish中接種含有納米顆粒的細胞。一旦細胞裝有納米顆粒,它們就會對磁力有反應,研究人員在Petri dish的頂部安裝磁力環(huán)。
為了評估這種技術下的細胞生長,研究人員在8天的時間內(nèi)肉眼觀察并定量監(jiān)測了人膠質(zhì)母細胞瘤細胞的形成率、大小和存活率。他們利用紅色熒光蛋白來監(jiān)測細胞。
24小時后,多細胞聚集物開始懸浮在液體中。在接下來的72小時到192小時,橢球體的zui大直徑達1mm。在檢測了膠質(zhì)母細胞瘤體外產(chǎn)生的蛋白后,研究人員發(fā)現(xiàn)三維培養(yǎng)表達了適當?shù)牡鞍?,而對應的二維培養(yǎng)沒有。他們認為,三維培養(yǎng)適合這些腫瘤的研究。而二維培養(yǎng)中蛋白的缺乏,表明它不是研究癌癥的有效方法。
萊斯大學生物工程系的副教授Robert Raphael認為:“這種方法的美就在于它利用天然的細胞間相互作用來驅(qū)動三維結構的形成。此方法相當簡單,任何對藥物開發(fā)、干細胞或再生醫(yī)學感興趣的實驗室都可以此作為三維細胞培養(yǎng)的起點。“
這種三維組織培養(yǎng)有望應用在疾病研究上。M.D. Anderson癌癥中心的Wadih Arap教授表示:“對于癌癥研究,磁場所產(chǎn)生的‘隱性支架’已經(jīng)不再是單純的細胞培養(yǎng),而讓它們更像真正的腫瘤。我們下一步將應用這種磁性來探索腫瘤成像和治療上的應用
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