細(xì)胞培養(yǎng)需注意的5個問題

一、促生長因子及激素

各種激素、生長因子對于維持細(xì)胞的功能、保持細(xì)胞的狀態(tài)（分化或未分化）具有十分重要的作用。有些激素對許多細(xì)胞生長有促生長作用，如胰島素，它能促進細(xì)胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素對某一類細(xì)胞有明顯促進作用，如氫化可的松可促進表皮細(xì)胞的生長等。

二、營養(yǎng)成分

維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面：
1.氨基酸：是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料。所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸，此外還需要谷氨酰胺，它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用，所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源。
2.單糖：培養(yǎng)中的細(xì)胞可以進行有氧與無氧酵解，細(xì)胞對葡萄糖的吸收能力zui高，半乳糖zui低。體外培養(yǎng)動物細(xì)胞時，幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì)。
3.維生素：主要扮演輔酶、輔基的角色，*。
4.無機離子與微量元素：細(xì)胞生長除需要鈉、鉀、鈣、鎂、氮和磷等基本元素，還需要微量元素，如鐵、鋅、硒等。

三、滲透壓

細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓。對于大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞，滲透壓在260－320mOsm/kg的范圍都適宜。

四、無毒、無污染的微環(huán)境

體外生長的細(xì)胞對微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力，因此培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染、無微生物污染（如細(xì)菌、真菌、支原體、病毒等）、無其他對細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染（如抗體、補體）。
 

五、pH值

動物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，pH值約在7.2-7.4在細(xì)胞生長過程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強，二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，PH值發(fā)生變化。由于NaHCO3容易分解為二氧化碳，很不穩(wěn)定，致使緩沖系統(tǒng)難以地控制。合成培養(yǎng)基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng)，使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度（5％），與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)。