破碎細胞,進而提取出高純度、高活性的蛋白質或多肽,是每個科研工作者和從事生物技術工作的人的共同心聲。
超聲波破碎法在細胞破碎中應用zui普及,但是超聲破碎機理尚未*清楚,可能與空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪切作用有關。超聲破碎操作簡便,但是破碎成本高,易引起溫度的劇烈上升。在中~大規(guī)模操作時,產生的化學自由基能使某些敏感性活性物質失活。對不同菌種的發(fā)酵液,超聲破碎的效果差別較大。一般地,桿菌比球菌較易破碎,革蘭氏陰性細菌細胞比革蘭氏陽性細菌細胞較易破碎,對酵母菌的破碎效果較差。隨著科研的深入、生產的發(fā)展,人們對具有高活性的蛋白質或多肽的需求量越來越大。超聲波破碎已不能滿足人們的需求。
高壓細胞破碎原理與超聲波破碎原理不同,在高壓作用下,樣品從高壓室高速噴出,速度可達每秒幾百米。這種高速噴出的漿液又射到靜止的撞擊環(huán)上,被迫改變方向從出口管流出。細胞在這一系列過程中經歷了高速剪切、碰撞和空穴效應等,從而造成細胞的破碎。
一般認為壓力超過100Mpa就是超高壓。在超高壓條件下,生物體高分子立體結構中的非共價結合發(fā)生變化,使細胞膜破裂,菌體內成分泄漏,生命活動停止,微生物菌體破壞而死亡。所以,超高壓均質儀在細胞破碎等方面得到了重視和廣泛應用。
目前市場上的超高壓細胞破碎機有APV, Avestin, Niro等,這些細胞破碎機推廣較早。但是在細胞高活性破碎方面還是略遜*。低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀的問世,*市場空白。尤其在保持蛋白質或多肽活性方面,低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀的效果是顯著的①。這是因為進樣、破碎、出樣全過程在4~6℃低溫循環(huán)水浴中進行,細胞高壓破碎時產生的熱量被冷卻循環(huán)水吸收。在內部核心結構設計方面,低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀,經過反復設計、計算和實驗,找到了剪切、碰撞、空穴三種效應搭配的*比例。這種*設計,既保證了細胞的破碎率,同時zui大限度地保持了蛋白質或多肽的活性。
我們曾用BRANSON超聲波細胞破碎儀和低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀破碎相同量的大腸桿菌,進行對比實驗。實驗結果顯示,使用BRANSON超聲波破碎得到的多肽活性為110U/mg, 而使用低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀得到的數(shù)據(jù)是155U/mg。用低溫超高壓連續(xù)流細胞破碎儀破碎后的多肽活性比超聲波破碎提高了40%。
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