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當(dāng)前位置:研域(上海)化學(xué)試劑有限公司>>公司動態(tài)>>簡單介紹細(xì)胞凍存的方法
?嗜多染紅細(xì)胞是分裂后期的紅細(xì)胞由幼年發(fā)展為成熟紅細(xì)胞的一個階段,此時紅細(xì)胞的主核已排出,因胞質(zhì)內(nèi)含有核糖體,Giemsa染色呈灰藍(lán)色,成熟紅細(xì)胞的核糖體已消失,被染成淡橘紅色。骨髓中嗜多染紅細(xì)胞數(shù)量充足,由于無核,極易觀察到微核,因此,骨髓中嗜多染紅細(xì)胞成為微核試驗的細(xì)胞群。
細(xì)胞實驗原理
染色單體或染色體的無著絲點斷片,或因紡錘體受損而丟失的整個染色體,在細(xì)胞分裂后期,仍然在細(xì)胞質(zhì)中。末期之后,單獨形成一個或幾個規(guī)則的次核,被包含在子細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi),因比主核小,故稱為微核。大小應(yīng)為主核的1/20~1/5。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣。微核率是和用藥的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān),所以可用簡易的、快速、靈敏的微核計數(shù)來代替繁雜的畸變?nèi)旧w計數(shù)。Matter 和Schmid建立的微核測試是一種比較理想的方法,目前國內(nèi)外已把微核測試用于輻射損傷、化學(xué)誘變劑、新藥試驗、染色體遺傳疾病及癌癥前期診斷等各方面。
細(xì)胞凍存的方法:
1.細(xì)胞:選對數(shù)生長期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時前換液一次。
2.計數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液,計數(shù),令細(xì)胞密度達(dá)5×106/ml,離心去上清,吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液,按上法一滴滴加入離心管中,然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中,每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后,仔細(xì)檢查,定要封嚴(yán),必要時可浸入藍(lán)色液中觀察,為安全起見,把安剖縫入紗布小袋中,以防液氮浸入后,融解時因受熱發(fā)生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩,末端扎有小牌,注明:細(xì)胞名稱,凍存日期,以便日后查找。
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