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PCR試驗(yàn)交流
點(diǎn)擊次數(shù)：5417 發(fā)布時(shí)間：2011-6-16
你會(huì)讀marker嗎？
zui近在做PCR試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)要了解的東西太多了，很多非常基礎(chǔ)的常識(shí)性的知識(shí)都很容易出問(wèn)題，zui近就出現(xiàn)電泳圖中的Marker問(wèn)題，一起做試驗(yàn)的前輩教我從zui后一條開(kāi)始數(shù)，zui后一條為11，代表72bp，前面再類(lèi)推。按此方法比較一直以為自己沒(méi)跑出所需條帶，降低條件反復(fù)跑。
然后坐下來(lái)總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，終于我認(rèn)識(shí)到可能是Marker的閱讀問(wèn)題，并且在試驗(yàn)中我試著用不同的電泳時(shí)間看結(jié)果，發(fā)現(xiàn)有時(shí)候條帶總共是10條，有時(shí)候是9條。我意識(shí)到按照zui后一條條帶來(lái)定位是不準(zhǔn)確的。并上網(wǎng)查看Marker說(shuō)明，發(fā)現(xiàn)不同的Marker說(shuō)明表格顯示有的總共11條，有的總共13條。但是在對(duì)照?qǐng)D片上可以發(fā)現(xiàn)zui后的11號(hào)或13號(hào)甚至12號(hào)條帶往往光有數(shù)據(jù)而不顯示條帶，這說(shuō)明zui后1條條帶甚至倒數(shù)第二條條帶是很難顯示的。有時(shí)它們?cè)谕粋€(gè)條帶上標(biāo)記兩個(gè)數(shù)據(jù)，這是因?yàn)槿绻娪緯r(shí)間或膠的濃度影響，有時(shí)無(wú)法分辨為兩條。因此，我可以確信，用Marker比較一定要從起始端開(kāi)始數(shù)，而不能根據(jù)zui末一個(gè)條帶來(lái)定位。拿到足夠的證據(jù)，同已經(jīng)做了1年多試驗(yàn)，就要發(fā)表文章的前輩討論，但他仍然堅(jiān)持自己的看法，說(shuō)是老師教他的。終于我將這個(gè)情況跟技術(shù)員及老板討論，zui終獲得認(rèn)同。這樣看來(lái)，這個(gè)問(wèn)題也不簡(jiǎn)單。
另外補(bǔ)充幾條：
1、是應(yīng)該從大條帶端開(kāi)始數(shù)，原因有二：
小條帶跑得快，時(shí)間長(zhǎng)了可能會(huì)跑出膠，所以電泳時(shí)要注意好時(shí)間；
在電泳過(guò)程中EB是向陰運(yùn)動(dòng)，所以跑到凝膠下緣的條帶染色很弱甚至不染色，也會(huì)看不到！必要時(shí)建議灌制長(zhǎng)膠。
2、marker中的小條帶分子量較小，跑的時(shí)間長(zhǎng)了容易彌散而導(dǎo)致看不清楚
3、同意上面的說(shuō)法，zui近也在跑電泳，我每次也是從zui下面數(shù)的，上面的條帶有時(shí)候顏色很淺看不出來(lái)！
4、另外還有一些商用Marker，有一個(gè)條帶亮度超過(guò)其他條帶（比如為其他的兩倍），比較容易分辨，也可以幫助定位！