認真點完96孔板的你,貼上封板膜,放入PCR儀,跑完4小時的程序后準備美美下班??戳艘谎蹟?shù)據(jù),再看一眼PCR板——你(瞳孔地震):“師兄!跑完PCR,邊緣孔的液體體積怎么看起來少了?”你師兄(仔細觀察):“把‘看起來’去掉。”
原來是因為
實驗室前輩們總結出了影響PCR的n大要素,反應步驟、引物設計……PCR板的選擇往往是最容易被忽視的,但同樣至關重要。
劃重點:PCR板的選擇,你避坑了嗎?
從核酸提取開始到后續(xù)目的片段定向擴增,都要在無DNase與RNase、無PCR抑制劑的環(huán)境中進行,否則這些污染物會大大降低擴增效率。這是PCR耗材的基本要求,質量的關鍵取決于生產(chǎn)環(huán)境的潔凈度和工藝質控。
硬質框架PCR板比普通PCR板有更高的硬度,不會出現(xiàn)“翹邊”的現(xiàn)象,在貼膜的時候方便對每個孔“雨露均沾”,達到良好的密封性。
PCR實驗在小體系(微升級別)中反應,且程序包含溫度的循環(huán)升降,這些都容易造成體系蒸發(fā)的邊緣效應,影響產(chǎn)物濃度。因此PCR板需搭配高質量的封板膜,降低體系蒸發(fā)率,確保最終數(shù)據(jù)的可靠性。
4小時PCR后的剩余體積 (初始體積-20ul)
PCR孔壁經(jīng)特殊設計的二氧化鈦著色工藝,能優(yōu)化熒光定量PCR (qRCR) 反應的熒光信號反射效率,減少孔間信號交叉污染。相較于透明的PCR耗材,白色PCR板和PCR管的孔壁能更靈敏地反射熒光信號,優(yōu)化實驗結果。
特殊著色工藝的白色PCR耗材優(yōu)化熒光信號結果
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