重組人體表皮(RhE)可以部分替代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、甚至可能比動(dòng)物實(shí)驗(yàn)更能作為人體情況預(yù)測(cè)參考的系統(tǒng),因此在刺激性和腐蝕性化學(xué)品的危害識(shí)別和監(jiān)管領(lǐng)域(如OECD TG 431試驗(yàn))具有重要的價(jià)值。制藥和化妝品等領(lǐng)域也始終在嘗試借助人造人體組織開(kāi)展耐受性、毒理學(xué)和刺激性研究,從而盡可能地減少開(kāi)展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
結(jié)果顯示,用BRAND Insert 2in1嵌套培養(yǎng)小室建立的RhE模型在形態(tài)學(xué)、屏蔽功能檢測(cè)和體外腐蝕性測(cè)試實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果與其他品牌小室內(nèi)建立的沒(méi)有顯著差異,并且在體外腐蝕性測(cè)試實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)中表現(xiàn)出更小的標(biāo)準(zhǔn)偏差。
對(duì)RhE模型的橫截面進(jìn)行HE染色,可以看到清晰的組織結(jié)構(gòu)。
圖1. 對(duì)在BRAND Insert 2in1嵌套培養(yǎng)小室(左)與某品牌小室(右)中培養(yǎng)的RhE模型進(jìn)行HE染色,人源性角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)育成了具有多層角質(zhì)的結(jié)構(gòu)。
在570nm波長(zhǎng)下檢測(cè)出給定的時(shí)間里暴露于化學(xué)品的培養(yǎng)物平均存活率大于50%,顯示RhE模型具有明顯的屏障功能。
圖2. 用MTT法檢測(cè)暴露于PBS和Triton X-100的RhE模型活性。
陰性對(duì)照測(cè)試比對(duì)結(jié)果顯示,在BRAND Insert 2in1嵌套培養(yǎng)小室與某品牌小室中培養(yǎng)的RhE模型存活率相近,并且由BRAND Insert 2in1嵌套培養(yǎng)小室建立的RhE模型存活率結(jié)果的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)偏差更小。
表1. MTT法檢測(cè)暴露于PBS的RhE模型活性
為了測(cè)試RhE模型是否可用于鑒別化學(xué)物質(zhì)的潛在腐蝕性,將建立的RhE模型暴露在一組化學(xué)物質(zhì)中3分鐘或60分鐘后,對(duì)其進(jìn)行MTT檢測(cè),并將檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行歸一化處理。結(jié)果顯示,暴露后,RhE模型在非腐蝕性物質(zhì),如4-(甲硫基)-苯甲醛中可以保持大于50%的活性,而在預(yù)評(píng)估為腐蝕性物質(zhì)的甲酸、乳酸中以及陽(yáng)性對(duì)照組實(shí)驗(yàn)中的活性顯著降低。
圖3. 不同化學(xué)物質(zhì)的腐蝕性比較(NC,陰性對(duì)照。PC,陽(yáng)性對(duì)照)
綜上所述,BRAND Insert 2in1嵌套培養(yǎng)小室建立的RhE模型,具有良好的形態(tài),清晰的組織結(jié)構(gòu),完整的屏障功能,可用于體外化學(xué)腐蝕性分析,并能帶來(lái)更穩(wěn)定的檢測(cè)數(shù)據(jù)。
Insert 2 in 1 細(xì)胞培養(yǎng)小室 亮點(diǎn)一覽
支持懸掛 & 站立2種模式,兼容市面上大部分ANSI/SLAS規(guī)格的多孔培養(yǎng)板。通過(guò)掛鉤或底角三點(diǎn)固定,站立模式下透過(guò)膜與底面保持平行且留有1 mm距離,提供充足的細(xì)胞生長(zhǎng)空間。
獨(dú)特的偏心設(shè)計(jì)讓加液、換液一步到位,無(wú)需移動(dòng)小室,減少對(duì)細(xì)胞不必要的干擾,降低污染風(fēng)險(xiǎn)。
升級(jí)的Cellgrade Plus表面處理,除了必要的羧基和羰基外,膜表面還含有類(lèi)蛋白成分,適用于減血清培養(yǎng),讓培養(yǎng)條件苛刻的細(xì)胞更快貼壁、高效增殖。
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