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鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素
點擊次數(shù)：618 發(fā)布時間：2022-3-31
鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
AKIRIN2蛋白抗體
ADP核糖基化樣因子8B抗體
三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體
AKIRIN1蛋白抗體
錨定蛋白樣蛋白1抗體
腺苷酸激酶2抗體
黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體
未知糖基化轉(zhuǎn)移酶AER61抗體
鐵蛋白Fe65抗體
抑癌基因ras同源家族1抗體
轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體
心鈉素抗體
丙氨酰tRNA合成酶2抗體
絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體
核突觸蛋白α抗體
自噬相關(guān)蛋白4B抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體
α-輔肌動蛋白4(內(nèi)參)抗體
堿性磷酸酶抗體
AU1 tag標(biāo)簽抗體
脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1
蛋白激酶B
蛋白激酶B
血管生成素樣蛋白2抗體
血管生成素3/血管生成素4抗體
膜粘連蛋白 I抗體
膜粘連蛋白 Ⅱ抗體
活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
水通道蛋白4抗體