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中腦核仁蛋白抗體生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)
點(diǎn)擊次數(shù)：715 發(fā)布時(shí)間：2022-5-5
中腦核仁蛋白抗體生物素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對(duì) 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來篩選最適條件；
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生物素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合；
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會(huì)對(duì)生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用；
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對(duì)某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。
溫馨提示：
在實(shí)驗(yàn)后,請(qǐng)注意回收稀釋的抗體?；厥盏目贵w在進(jìn)行Western實(shí)驗(yàn)時(shí)至少可以重復(fù)使用10次。稀釋后的抗體，包括已經(jīng)使用過的稀釋抗
體，4二保存?；厥蘸笾貜?fù)使用的抗體，使用方法同新鮮稀釋的抗體。如果在重復(fù)使用過程中發(fā)現(xiàn)抗體出現(xiàn)輕微混濁現(xiàn)象，可以10000g離心
1-3分鐘,取上清用于后續(xù)檢測(cè)。如果回收的抗體出現(xiàn)明顯的絮狀物或長(zhǎng)需長(zhǎng)菌等情況,則可以考慮廢棄該抗體。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
JNK相互作用蛋白4抗體
氨基末端激酶1/2抗體
氨基末端激酶1/2/3抗體
氨基末端激酶1/3抗體
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磷酸化原癌基因c-Jun抗體
磷酸化活化蛋白激酶D抗體
磷酸化活化蛋白激酶B抗體
磷酸化活化蛋白激酶B抗體
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磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗體
磷酸化蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體
氨基末端激酶2抗體
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氨基末端激酶3抗體
磷酸化活化蛋白激酶B抗體
JmjC結(jié)構(gòu)域組蛋白去甲基化酶H3-K36抗體
組蛋白去甲基化酶JARID2抗體
JAK和微管相互作用蛋白2抗體
活化蛋白激酶B抗體
磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體
凋亡細(xì)胞清除受體抗體
磷酸化原癌基因c-Jun抗體
Notch配體Jagged 2蛋白抗體