一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

了解目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的構(gòu)造和使用原理，掌握微生物細(xì)胞大小的測(cè)定方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理

微生物細(xì)胞的大小是微生物重要的形態(tài)特征之一，由于菌體很小，只能在顯微鏡下來(lái)測(cè)量。用于測(cè)量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺。

目鏡測(cè)微尺是一塊圓形玻片，在玻片中央把5mm長(zhǎng)度刻成50等分，或把10 mm長(zhǎng)度刻成100等分。測(cè)量時(shí)，將其放在接目鏡中的隔板上（此處正好與物鏡放大的中間像重疊）來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。由于不同目鏡、物鏡組合的放大倍數(shù)不相同，目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際表示的長(zhǎng)度也不一樣，因此目鏡測(cè)微尺測(cè)量微生物大小時(shí)須先用置于鏡臺(tái)上的鏡臺(tái)測(cè)微尺校正，以求出在一定放大倍數(shù)下，目鏡測(cè)微尺每小格所代表的相對(duì)長(zhǎng)度。

鏡臺(tái)測(cè)微尺是中央部分刻有等分線的載玻片，一般將lmm等分為100格，每格長(zhǎng)l0μm（即0.0lmm），是專(zhuān)門(mén)用來(lái)校正目鏡測(cè)微尺的。校正時(shí)，將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在載物臺(tái)上。

由于鏡臺(tái)測(cè)微尺與細(xì)胞標(biāo)本是處于同一位置，都要經(jīng)過(guò)物鏡和目鏡的兩次放大成象進(jìn)入視野，即鏡臺(tái)測(cè)微尺隨著顯微鏡總放大倍數(shù)的放大而放大，因此從鏡臺(tái)測(cè)微尺上得到的讀數(shù)就是細(xì)胞的真實(shí)大小，所以用鏡臺(tái)測(cè)微尺的已知長(zhǎng)度在一定放大倍數(shù)下校正目鏡測(cè)微尺，即可求出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度，然后移去鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上待測(cè)標(biāo)本片，用校正好的目鏡測(cè)微尺在同樣放大倍數(shù)下測(cè)量微生物大小。

三、實(shí)驗(yàn)器材

1. 活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面菌種、枯草桿菌（Baccillus subtilis）染色標(biāo)本片。

2. 器材：顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、蓋玻片、載玻片、滴管、雙層瓶、擦鏡紙。

四、實(shí)驗(yàn)方法

1. 目鏡測(cè)微尺的校正

把目鏡的上透鏡旋下，將目鏡測(cè)微尺的刻度朝下輕輕地裝入目鏡的隔板上，把鏡臺(tái)測(cè)微尺置于載物臺(tái)上，刻度朝上。先用低倍鏡觀察，對(duì)準(zhǔn)焦距，視野中看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行，移動(dòng)推動(dòng)器，使兩尺重疊，再使兩尺的“0”刻度*重合，定位后，仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)*重合的刻度（圖20-3），計(jì)數(shù)兩重合刻度之間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。因?yàn)殓R臺(tái)測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)l0μm,所以由下列公式可以算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。

例如目鏡測(cè)微尺5小格正好與鏡臺(tái)測(cè)微尺5小格重疊，已知鏡臺(tái)測(cè)微尺每小格為l0μm,則目鏡測(cè)微尺上每小格長(zhǎng)度為=5×10μm/5=10μm

用同法分別校正在高倍鏡下和油鏡下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的長(zhǎng)度。

由于不同顯微鏡及附件的放大倍數(shù)不同，因此校正目鏡測(cè)微尺必須針對(duì)特定的顯微鏡和附件（特定的物鏡、目鏡、鏡筒長(zhǎng)度）進(jìn)行，而且只能在特定的情況下重復(fù)使用，當(dāng)更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí)，必須重新校正目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。

2. 細(xì)胞大小的測(cè)定

（1）將酵母菌斜面制成一定濃度的菌懸液（10-2）

（2）取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片。

（3）移去鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上酵母菌水浸片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)測(cè)量酵母菌菌體的長(zhǎng)，寬各占幾格（不足一格的部分估計(jì)到小數(shù)點(diǎn)后一位數(shù)）。測(cè)出的格數(shù)乘上目鏡測(cè)微尺每格的校正值，即等于該菌的長(zhǎng)和寬。一般測(cè)量菌體的大小要在同一個(gè)標(biāo)本片上測(cè)定10-20個(gè)菌體，求出平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體進(jìn)行測(cè)定。

（4）同法用油鏡測(cè)定枯草桿菌染色標(biāo)本的長(zhǎng)和寬。

五、實(shí)驗(yàn)記錄：
將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下列表格
表20-1 目鏡測(cè)微目尺校正結(jié)果
物鏡 目尺格數(shù) 臺(tái)尺格數(shù) 目尺校正值（μm）
10×
40×
100×
表20-2 酵母菌大小測(cè)定記錄 （格）
　　1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 平均值
長(zhǎng)
寬
表20-3 枯草桿菌大小測(cè)定記錄 （格）
細(xì)胞數(shù) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 平均值
長(zhǎng)
寬
結(jié)果計(jì)算 長(zhǎng)μm=平均格數(shù)×校正值
寬μm=平均格數(shù)×校正值
大小表示：寬μm×長(zhǎng)μm