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僅供科研

NanoDrop 2000-Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度

Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)是NanoDrop的產(chǎn)品，應(yīng)用液體的表面張力特性，樣品體積只需要0.5~2ul，在檢測(cè)臺(tái)上，經(jīng)上下臂的接觸拉出固定的光徑達(dá)到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細(xì)管等耗材檢測(cè)吸收值的優(yōu)點(diǎn)。此產(chǎn)品設(shè)計(jì)受保護(hù)，并在全普遍廣受歡迎，其準(zhǔn)確度與便利性讓科學(xué)家得以更有效率進(jìn)行各項(xiàng)研究。

Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計(jì)使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測(cè)，且不需要暖機(jī)，開機(jī)后立即使用。搭配高感度CCD array檢測(cè)器，檢測(cè)吸收值可高達(dá)300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul），大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測(cè)。

待測(cè)樣品的均質(zhì)性是NanoDrop 2000的較為高要求，一般核酸、蛋白質(zhì)樣品能在檢測(cè)前以vortex mixer震勻?yàn)檩^為勻，若無(wú)vortex mixer也應(yīng)以pipette吸放數(shù)次混勻。若擔(dān)心genomic DNA可能因前述動(dòng)作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測(cè)前呈現(xiàn)均勻狀態(tài)，以確保 2ul 具有代表性。

檢測(cè)時(shí)選擇不同檢測(cè)模式，可以得到較為快速的結(jié)果：
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。

● UV-Vis – 190~840nm間所有波長(zhǎng)的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現(xiàn)）。

● A280蛋白質(zhì)定量法 – 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio及蛋白質(zhì)濃度。僅適用于純化后的蛋白質(zhì)，須具有已知的質(zhì)量消光系數(shù)（mass extinction coefficient）方可計(jì)算。

● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長(zhǎng)吸收值結(jié)果，自動(dòng)畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算R square，待測(cè)蛋白質(zhì)濃度。

* 蛋白質(zhì)檢測(cè)模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時(shí)間會(huì)逐漸加深，使用前請(qǐng)?jiān)旈喸噭┱f(shuō)明書并制備不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在較為快時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)，以得到良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線較為多可有七個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品較為多可做五重復(fù)。

* 測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)樣品體積需使用 2ul，每個(gè)樣品檢測(cè)后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號(hào)： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質(zhì)的殘留。

濃度范圍：

樣品種類	較為低濃度	較為高濃度（*過(guò)時(shí)請(qǐng)稀釋樣品）	再現(xiàn)性（五重復(fù)以上）
核酸	2 ng/ul	15000 ng/ul （dsDNA） 12000 ng/ul （RNA）	濃度范圍在 2-100 ng/ul 時(shí)，SD為 ± 2 ng/ul 濃度范圍大于 100 ng/ul 時(shí)，CV為 ± 2%
純BSA	0.10 mg/ml	100 mg/ml	濃度范圍在 0.05-10 mg/ml 時(shí)，SD為 ± 0.10 mg/ml 濃度大于 10 mg/ml 時(shí)，CV為 ± 2%
蛋白質(zhì)，以BCA方式定量	0.2 mg/ml	8.0 mg/ml	CV：± 2% （在可偵測(cè)的濃度范圍內(nèi)皆然）
蛋白質(zhì)，以modified Lowry方式定量	0.2 mg/ml	4.0 mg/ml	CV：± 2% （在可偵測(cè)的濃度范圍內(nèi)皆然）
蛋白質(zhì)，以Bradford方式定量	100 ug/ml	8000 ug/ml	濃度范圍在 100-500 ug/ml 時(shí)，SD為 ± 25 ug/ml 濃度大于 500 ug/ml 時(shí)，CV為 ± 5%
蛋白質(zhì)，以Mini Bradford方式定量	15 ug/ml	100 ug/ml	濃度范圍在 15-50 ug/ml 時(shí)，SD為 ± 4 ug/ml 濃度大于 50 ug/ml 時(shí)，CV為 ± 5%

NanoDrop　ND-2000C

產(chǎn)品描述：

NanoDrop　ND-2000C為NanoDrop　ND-2000的升級(jí)版本，ND-2000C具有ND-2000全部功能，除此之外，它還有以下突出特點(diǎn)：

1、檢測(cè)耗時(shí)更短，僅需3秒鐘；

2、具比色杯或者檢測(cè)孔兩種選擇，適合檢測(cè)各種類型的樣本，包括易揮發(fā)性物質(zhì)的檢測(cè)；

3、檢測(cè)范圍更加寬泛，檢測(cè)下限可低至0.4 ng/μl （dsDNA）；

4、內(nèi)置比色杯，可進(jìn)行實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)曲線研究，或者OD600細(xì)胞濃度的測(cè)量。

ND-2000C技術(shù)參數(shù)：

檢測(cè)孔測(cè)量時(shí):

1、波長(zhǎng)范圍: 190-840nm；

2、波長(zhǎng)精度: 1nm；

3、分辨率: <1.8 nm （FWHM at Hg 253.7 nm）；

4、其它: 1mm光程長(zhǎng)度（可自動(dòng)調(diào)整到0.05mm）；

5、檢測(cè)下限：2ng/μl（dsDNA）；

6、檢測(cè)上限：15000ng/μl（dsDNA）；

7、吸光率度：0.002 absorbance （1mm光程）；

8、吸光率準(zhǔn)確性：2%（at 0.76 at 257 nm）；

9、吸光率范圍：0.02-300 （相當(dāng)于10mm光程）；

10、核酸檢測(cè)周期：< 5s；

11、體積：14cm×20cm。

比色杯測(cè)量時(shí)：

1、光柱高度：8.5 mm；

2、控溫，37 ± 0.5 °C；

3、攪拌速度: 150 – 850 rpm;

4、四種光徑可供選擇，分別為1，2，5，10mm；

5、吸光率范圍：0.002 – 1.5；

6、檢測(cè)下限：0.4 ng/μl （dsDNA）；

7、檢測(cè)上限：750 ng/μl （dsDNA）；

8、檢測(cè)時(shí)間：< 3 s；

9、重量：2.1 kg.

二、使用方法舉例

dsDNA：
在主畫面點(diǎn)選Nucleic Acid，電腦與儀器自動(dòng)完成連線。依照DNA所溶於之液體準(zhǔn)備該溶液（務(wù)必確認(rèn)DNA溶於二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂後再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點(diǎn)在偵測(cè)臺(tái)上，放下上臂後再按Measure。點(diǎn)此觀看操作影片。

結(jié)果：
DNA濃度即以 9.691 x 50 = 484.5 算出。 260/280介於1.8~2.0通常代表此為較純的DNA（隨DNA組成不同會(huì)有差異）。 260/230高於260/280，介於1.8~2.2通常表示純化過(guò)程殘留污染物較少。若欲察看220~340nm間其他波長(zhǎng)的吸收值，可使用滑鼠拉動(dòng)位於230nm的直線，或在右邊λ處輸入其他波長(zhǎng)數(shù)值。

三、結(jié)果整理：
NanoDrop2000 軟體在偵測(cè)一開始會(huì)詢問檔案欲存至何處，若未，則檔案會(huì)存在上一個(gè)使用者的檔案內(nèi)。點(diǎn)此觀看或下載 Data 功能使用說(shuō)明。

四、注意事項(xiàng)：
1. 偵測(cè)後立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺(tái)面。先取一張將上下臺(tái)面的液體吸走，再將此laboratory wipe吸過(guò)樣品的面反折到內(nèi)部，折疊四次後以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。

2. 同一滴液體只能做一次偵測(cè)，欲重複定量同一樣品，請(qǐng)擦掉前一滴，重新取出一滴進(jìn)行偵測(cè)。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測(cè)量，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求，原則上不*過(guò) 2ul。並請(qǐng)使用2ul pipette避免體積不足導(dǎo)致液柱無(wú)法完整形成。唯蛋白質(zhì)樣品因呈色劑與蛋白質(zhì)本身特性，務(wù)必使用2ul進(jìn)行偵測(cè)。

4. 當(dāng)軟體跳出錯(cuò)誤訊息時(shí)，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀並依指示進(jìn)行障礙排除。常發(fā)生的情形是在偵測(cè)過(guò)程液柱並未正確形成，軟體會(huì)出現(xiàn)以下訊息。可先用肉眼觀察液柱是否未完整連接上下臺(tái)面，或樣品內(nèi)有泡泡，將上臂拉起後，擦掉該滴樣品，再重新進(jìn)行偵測(cè)，必要時(shí)可將樣品體積加大至2ul。

正確的液柱應(yīng)為：

5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其他無(wú)腐蝕性之液體皆可使用。

五、日常與定期維護(hù)：

1.平時(shí)保持臺(tái)面及儀器本身清潔。

2.定期校正。

常見問題：
問 1. 使用多少液體做測(cè)量？
答 1. 2ul，基本上可使用 0.5~2ul 做測(cè)量，隨各液體體積特性之不同會(huì)有不同體積需求，原則上不*過(guò) 2ul。並請(qǐng)使用2ul pipette 避免體積不足導(dǎo)致液柱無(wú)法完整形成。

問 2. 如何清潔臺(tái)座？
答2. 使用 laboratory wipe 將上下座的液體吸走，再將此 laboratory wipe 吸過(guò)樣品的面反折到內(nèi)部，折疊四次後以單方向多次擦拭臺(tái)面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。點(diǎn)此觀看清潔臺(tái)座影片。

問3. 儀器多久需要校正？
答3. 每臺(tái)儀器出廠前皆經(jīng)過(guò)多次測(cè)試，並附上測(cè)試報(bào)告。新機(jī)一年校正一次，之後建議每半年再進(jìn)行一次校正。本公司備有一年兩次的校正合約，以原廠標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行定期校正。若有特殊狀況亦可個(gè)案處理。

問4. 燈源多久需要更換？
答4.一般而言儀器內(nèi)一個(gè)氙氣燈可偵測(cè) 350萬(wàn)個(gè)樣品，依供電及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境會(huì)有些微差異。若儀器在初始化時(shí)反覆出現(xiàn)錯(cuò)誤訊息，請(qǐng)進(jìn)入Diagnostics內(nèi)進(jìn)行燈源強(qiáng)度確認(rèn)，若看不見任何光譜，即為燈源壽終之訊息。