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BioGrammatics—糖基化畢赤酵母表達(dá)體系
Pichia酵母菌屬的巴斯德畢赤酵母是當(dāng)今常用的單細(xì)胞真核表達(dá)體系,是載體構(gòu)建、表達(dá)、發(fā)酵和純化重組蛋白和肽的優(yōu)良體系。BioGrammatics在畢赤酵母的生命科學(xué)研究利用領(lǐng)域有著悠久的歷史和豐富的經(jīng)驗(yàn),通過與Research Corporation Technologies(RCT)合作開發(fā)出GlycoSwitch®技術(shù),利用該技術(shù)可以在畢赤酵母中表達(dá)的蛋白加以改性糖基化修飾。糖基化可影響蛋白質(zhì)折疊,穩(wěn)定性和蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用,因此利用GlycoSwitch®技術(shù)可設(shè)計(jì)具有更多“人類”糖基化特征的蛋白質(zhì),用以研發(fā)適用于人類的的生物藥物,以及改良常規(guī)重組蛋白質(zhì)。目前BioGrammatics可提供的基于畢赤酵母的產(chǎn)品包括快速簡單的蛋白質(zhì)表達(dá)、分子表達(dá)工具下的菌株設(shè)計(jì)(如強(qiáng)大的嚴(yán)格調(diào)控的啟動(dòng)子,的分泌基因組操作)、大規(guī)模高細(xì)胞密度酵母發(fā)酵(> 700 g / l wcw,200k升)、特定的酵母發(fā)酵條件設(shè)計(jì)、真核蛋白質(zhì)加工(折疊,分泌,糖基化)及酵母遺傳學(xué)分析等服務(wù)。
BioGrammatics pJAN-S1說明書
名稱:
pJAN-S1
描述:
細(xì)胞外表達(dá)載體,釀酒酵母 α交配因子前導(dǎo),nourseothricin選擇
pJAN-s1的描述,一般特征列表
- 整合的矢量
- 針對(duì)AOX1基因座
- 強(qiáng)甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子
- 釀酒酵母 α交配因子前導(dǎo)序列指導(dǎo)分泌
目錄編號(hào) | 描述 | 單位 | 價(jià)錢 |
---|---|---|---|
EV122-02 | 環(huán)狀質(zhì)粒 | 2微克 | $ 500.00 |
BioGrammatics公司產(chǎn)品:
一、畢赤酵母表達(dá)載體
重組蛋白在畢赤酵母中的表達(dá)常見于表達(dá)載體整合到畢赤酵母基因組中,基因組整合導(dǎo)致目的基因在畢赤酵母中穩(wěn)定表達(dá)。通過大規(guī)模的表達(dá)菌株發(fā)酵可生產(chǎn)大量的目的蛋白質(zhì)。基于目的蛋白和基因的自身特異性,在載體設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮以下因素:1)胞內(nèi)表達(dá)或者分泌表達(dá);2)適宜的啟動(dòng)子(誘導(dǎo)型,組成型,強(qiáng),弱);3)選擇標(biāo)記;4)特定基因/ (開放閱讀框)ORF序列;5)表達(dá)盒在畢赤酵母基因組中適的位置。
BioGrammatics在畢赤酵母表達(dá)載體研究領(lǐng)域擁有豐富的經(jīng)驗(yàn),創(chuàng)建并測(cè)試了大量的表達(dá)載體,以優(yōu)化數(shù)百種基因的表達(dá)和用于特定的應(yīng)用,包括細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外表達(dá),膜蛋白的表達(dá),高水平蛋白質(zhì)生產(chǎn)以及蛋白質(zhì)在代謝途徑中的表達(dá)和支持重組蛋白質(zhì)產(chǎn)物宜加工程度的蛋白質(zhì)。
BioGrammatics采用的pJ載體(pJ – vectors, Jeannies vectors)是4-5kb的質(zhì)粒,帶有氨芐青霉素篩選基因和“無縫”克隆方案。克隆方案基于在其識(shí)別序列之外切割的IIS型限制酶,因此,可在終表達(dá)載體中去除限制酶結(jié)合位點(diǎn),并且可以在不多加入不需要的密碼子的情況下加入ORF。
Product | Description |
pJAN-s1 | extracellular expression vector, S. cerevisiae α mating factor leader, nourseothricin selection |
pJAZ-s1 | extracellular expression vector, S. cerevisiae α mating factor leader, zeocin selection |
pJAG-s1 | extracellular expression vector, S. cerevisiae α mating factor leader, G418 selection |
pJAN | intracellular expression vector, nourseothricin selection |
pJAZ | intracellular expression vector, zeocin selection |
pJAG | intracellular expression vector, G418 selection |
二、畢赤酵母表達(dá)菌株
BioGrammatics提供BG和GlycoSwitch®菌株兩種畢赤酵母表達(dá)菌株系列。其中BG菌株來源于野生巴斯德畢赤酵母菌株,初于1940年由加利福尼亞的Herman Phaff分離。我們使用Illumina HiSeq技術(shù)對(duì)Phaff菌株進(jìn)行單菌落分離,成為BioGrammatics起始的原始菌株BG08,BG08在經(jīng)過改良以消除細(xì)胞質(zhì)殺傷質(zhì)粒的能力產(chǎn)生野生型表達(dá)菌株BG10。此后除了BG09之外,BG系列中的所有后續(xù)菌株均通過的BG10基因組操作衍生而來。 而BG09是BG08的一個(gè)特定變體,已開發(fā)用于在特定的胰蛋白酶切割位點(diǎn)標(biāo)記13C同位素后進(jìn)行質(zhì)譜分析。
除BG系列外,BioGrammatics還是RCT的GlycoSwitch®菌株經(jīng)銷商。 GlycoSwitch®菌株系列源于20世紀(jì)70年代的巴斯德畢赤酵母GS115菌株,是Phaff菌株的突變分離株之一,選擇用于組氨酸營養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)。初的GlycoSwitch®Man5菌株來源于比利時(shí)根特大學(xué)和法蘭德斯生物技術(shù)研究所(VIB)的Roland Contreras博士,Nico Callewaert博士及其同事的合作分離。 SuperMan5菌株是由BioGrammatics研發(fā)的GlycoSwitch®Man5的后續(xù)修飾菌株,其突變體och1基因座的所有同源性區(qū)域基因已被去除以防止其通過同源重組而逆轉(zhuǎn)為野生型。
Product | Description |
Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+) | GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures |
Pichia pastoris SuperMan5 strain (his—) | GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph) |
Pichia pastoris BG10 strain | Wild type Pichia pastoris expression strain (killer plasmid free) |
Pichia pastoris BG11 strain | Derivative of Pichia pastoris BG10 strain, aox1Δ, MutS (methanol utilization slow) |
Pichia pastoris BG09 strain | Derivative of Pichia pastoris BG08 strain, arg4Δ::nourseothricinR, lys2Δ::hygromycinR(arginine, lysine auxotroph) |
Pichia pastoris BG12 strain | Derivative of Pichia pastoris BG10 strain, his4Δ (histidine auxotroph) |
Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+, pep4Δ) | GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (PEP4 protease deletion) |
三、具有修飾糖基化的畢赤酵母菌株 - GlycoSwitch®技術(shù)。
GlycoSwitch系列菌株是與BioGrammatics與Research Corporation Technologies(RCT)合作,提供個(gè)可進(jìn)行糖基化修飾的畢赤酵母表達(dá)載體。糖基化可影響蛋白質(zhì)折疊,穩(wěn)定性和蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)相互作用,因可用于設(shè)計(jì)生成具有更多“人類”糖基化的蛋白質(zhì)和生物制藥,以及改良其他類別的重組蛋白質(zhì)。其核心GlycoSwitch®菌株具有中心聚糖加工酶(OCH1),可阻止聚糖延伸,并表達(dá)外源甘露糖苷酶以將現(xiàn)有聚糖修剪成更均勻的Man5結(jié)構(gòu)。此外,BioGrammatics還可提供基于GlycoSwitch®技術(shù)的定制化研發(fā)合同服務(wù),使用BioGrammatics公司的豐富的Pichia專業(yè)技術(shù)為客戶提供特定應(yīng)用的量身定制糖蛋白。
Product | Description |
Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+) | GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures |
Pichia pastoris SuperMan5 strain (his—) | GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (histidine auxotroph) |
GlycoSwitch Expression Vector Kit |
|
pGlycoSwitch®–GnT–I–HIS | Histidine selection vector for expression of GlcNAc transferase I activity in Pichia pastoris |
pGlycoSwitch®–ManII/1 | G418 selection vector for expression of Mannosidase II activity in Pichia pastoris |
pGlycoSwitch®–GnT–II | Hygromycin selection vector for expression of GlcNAc transferase II activity in Pichia pastoris |
pGlycoSwitch®–GalT/1 | Nourseothricin selection vector for expression of Gal transferase I activity in Pichia pastoris |
Pichia pastoris SuperMan5 strain (HIS+, pep4Δ) | GlycoSwitch® strain, Man5 N-linked oligosaccharide structures (PEP4 protease deletion) |
pGlycoSwitch®–GnT–I | Zeocin selection vector for expression of GlcNAc transferase I activity in Pichia pastoris |
四、畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)培養(yǎng)基
該系列產(chǎn)品于畢赤酵母表發(fā)體系發(fā)酵培養(yǎng)或擴(kuò)增,包括干粉和濃縮液,用于配制100ml和2.5L的培養(yǎng)液。
貨號(hào) | 類 型 | 規(guī) 格 |
PD001-100 | 1 g/ml stock solution, prepares 2.5 liters of YPD-nourseothricin plates | 100 mg |
PM001-100 | pouch of powdered medium, prepares 100 ml | 1 pouch |
PM001-500 | pouch of powdered medium, prepares 500 ml | 1 pouch |
上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購服務(wù)商
1:強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。
2:產(chǎn)品種類齊全,經(jīng)營超過700多品牌,基本涵蓋所有生物實(shí)驗(yàn)試劑耗材。
3:提供加急服務(wù),貨品一般1-2周到貨。
4:富有競爭力的價(jià)格優(yōu)勢(shì),絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢(shì)。
5:多年積累良好的信譽(yù),大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國藥、fisher等知藥企。
6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。
7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā),歡迎合作。