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JM109,DH,BL21感受態(tài)有何區(qū)別

時(shí)間:2013-5-9閱讀:1145
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1:DH菌株
DH是一種常用于質(zhì)??寺〉木?。E.coli DH在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí),可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α-互補(bǔ)??捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株。

基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1

2:BL21(DE3) 菌株

該菌株用于表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動(dòng)子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。T7噬菌體RNA聚合酶位于λ 噬菌體DE3區(qū),該區(qū)整合于BL21的染色體上。該菌適合表達(dá)非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3)

3:BL21(DE3) pLysS菌株

該菌株含有質(zhì)粒pLysS,因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因,能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平,但不干擾目的蛋白的表達(dá)。該菌適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。

基因型:F-,ompT hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3,pLysS ,Camr

4:JM109菌株

該菌株在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化或用M13 phage載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),由于載體DNA產(chǎn)生的LacZa多肽和JM09編碼的LacZΔM15進(jìn)行α-互補(bǔ),從而顯示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鑒別重組體菌株

基因型:recA1,endA1,gyrA96,thi-1,hsdR17,supE44,relA1,Δ(lac-proAB)/F’[traD36,proAB+,lacIq,lacZΔM15]

5:*0菌株

該菌株適用于的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。

基因型:F- ,mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC), φ80 ,lacZΔM15,△lacⅩ74, recA1 ,araΔ139Δ(ara-leu)7697, galU ,galK ,rps, (Strr) endA1, nupG

6:HB101菌株

該菌株遺傳性能穩(wěn)定,使用方便,適用于各種基因重組實(shí)驗(yàn)

基因型:supE44,hsdS20(rB-mB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl-5,mtl-1,leuB6,thi-1
 

M110或 SCS110

大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的*個(gè)胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。 常用的菌株都會(huì)產(chǎn)生dam,dcm,從而受到甲基化的影響.

部分限制性內(nèi)切酶對(duì)甲基化的DNA不能切割,如FbaI和MboI等,一般生物公司提供的內(nèi)切酶說(shuō)明中均有說(shuō)明。

大多數(shù)酶切位點(diǎn)的甲基化不影響切割,而有些會(huì)影響,如XbaI, BclI等。而且甲基化只發(fā)生在特定序列,以XbaI為例,只有在位點(diǎn)序列旁出現(xiàn)GA或TC,該XbaI位才會(huì)被甲基化。

而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:
(1)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識(shí)別切割位點(diǎn)與MboI相同;但不受甲基化影響;

(2)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進(jìn)行DNA的制備,如E.coli JM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒(méi)有甲基化酶,從這些細(xì)胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。

E.coli JM110
要排除dam,dcm甲基化的影響,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如JM110

如果由JM110或 SCS110等甲基化缺失的菌株產(chǎn)生的質(zhì)粒,則不會(huì)被甲基化.

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