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小鼠D二聚體（D2D）定量檢測試劑盒（ELISA）

2012-10-23　閱讀(1994)

 

僅供科研使用，不得用于醫(yī)學診斷。
使用前仔細閱讀本說明書。
 
用    途：用于定量檢測小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中D二聚體（D2D）的含量。
工作原理
本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），測定樣品中小鼠D二聚體（D2D）的水平。向預先包被小鼠D二聚體（D2D）抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的D二聚體（D2D）抗體，經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的組分，然后再加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中小鼠D二聚體（D2D）的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成

1
標準品（2000ng/ml）
0.5ml
7
顯色劑A液
6ml
2
標準品稀釋液
6mL
8
顯色劑B液
6ml
3
酶標包被板
12孔×8條
9
終止液
6ml
4
酶標試劑
6ml
10
說明書
1份
5
20×濃縮洗滌液
25ml
11
封板膜
2張
6
樣品稀釋液
6ml
12
密封袋
1個

注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：2000、1000、500、250、125、0ng/ml
需要而未提供的試劑和器材
1． 37℃恒溫箱。
2． 標準規(guī)格酶標儀。
3． 精密移液器及一次性吸頭
4． 蒸餾水，
5． 一次性試管
6． 吸水紙
注意事項
1． 從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差
3． 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。
4． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
5． 為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7． 底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中
 
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
操作程序
1． 分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘。
2． 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復5次，拍干。
3． 每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
4． 取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
5． 測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
6． 根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
準備試劑，樣品和標準品
 


 

加入準備好的樣品、標準品和酶標試劑，37℃反應60分鐘
 
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內(nèi)讀OD值
 
計算
 
檢測范圍：62.5 ng/ml -2000ng/ml。
規(guī)格：    96T/盒
保存：    2-8℃
有效期： 6個月（2-8℃）。


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