丙烯酰胺/甲叉 29:1, 40%溶液//ACRYL/BIS 29:1/0311-500MLelisa試劑盒實驗自備物品 1. 酶標儀（建議參考儀器使用說明提前預熱） 2. 微量加液器及吸頭，EP管3. 蒸餾水或去離子水，全新濾紙對照品：是指用于鑒別、檢查、含量測定的標準物質(zhì)，由國務院藥品監(jiān)督管理部門的單位制備、標定和供應。標準品系指用于生物測定、抗生素或生化藥品中含量或效價測定的標準物質(zhì)，一標準品進行標定；對照品除另有規(guī)定外，按干燥進行計算后使用。elisa血漿：應根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％（v/v）抗凝劑（0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2）混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。elisa實驗步驟：1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。 4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進行檢測。elisa標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為120 ng/L ，80 ng/L，40 ng/L，20ng/L，10 ng/L）。

名稱：丙烯酰胺/甲叉 29:1, 40%溶液
品牌：AMRESCO
Item Description：ACRYL/BIS 29:1
Code：0311-500ML
級別：超純級
CAS：
Size：500ML
Shipping Temperature：COLD
Hazardous Shipping Charges Apply*：Yes
Hazard Label for Container*：NEUROTOXIN/SUSPECTED CARCINOGEN/HIGHLY TOXIC/ IRRITANT
UN#*：2810
UNSPSC #：12352200
Shelf Life from Date of Manufacture**：2 years
Parent Category：Acrylamides
Child Category：Acryl/Bis, Premixed
Grade：ULTRA PURE GRADE


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衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線，計算各自的結合率，求出各自在 IC50時的濃度，并按下列公式計算交叉反應率。在人和動物體內(nèi)，由于抗原或半抗原入侵刺激機體而在細胞中產(chǎn)生的免疫球蛋白。能可逆、非共價、特異地與相應抗原結合，形成抗原-抗體復合體。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔 中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照） ↓ 于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml， 37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。elisa自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
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