技術(shù)文章
ELISA試劑盒包被抗原的選擇
閱讀:2140 發(fā)布時間:2019-10-24 ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化:
在這一過程中,一般情況下有三次加樣,它們分別是加標(biāo)本,加酶聯(lián)絡(luò)物,加底物。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,一般難于直接吸附在酶標(biāo)板上,一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì),比如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)有些濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上劇烈振蕩。也可在板孔中參與稀釋液,再在其參與血清標(biāo)本,然后在微型轟動器上轟動1分鐘以確?;旌?。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,逾越一星期測定的需低溫冰存。
ELISA試劑盒抗原包被選擇:
獸藥殘留檢測大部分藥物因分子量小,難于直接吸附于固相載體上,因此需要將小分子藥物經(jīng)過改造成合適的半抗原,再將半抗原與大分子的載體蛋白偶聯(lián)(通常是利用半抗原分子中含有一定數(shù)量的游離基團,如巰基、氨基、醛基、羧基、酮基、苯酚基、咪唑基等,這些基團可與蛋白質(zhì)分了中的對應(yīng)基團在偶聯(lián)劑的作用下發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)),從而形成半抗原-載體蛋白復(fù)合物,半抗原-載體蛋白復(fù)合物通過載體蛋白吸附到固相載體上,實現(xiàn)小分子藥物的包被過程。常用的載體蛋白有: 牛血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白(HSA)、牛的免疫球蛋白(TRP)、雞的卵清蛋(OVA)、血藍(lán)蛋白(KLH)等。
ELISA試劑盒包被條件的優(yōu)化:
包被液的選擇:一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,假設(shè)包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清天然凝結(jié)、縮短后即可取得。
包被濃度的選擇:包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改變,一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要明晰關(guān)于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經(jīng)過實驗來判定。
包被溫度的選擇:一般是4-8度條件下放置一個黑夜或許37度保溫2小時,我們劇烈主張4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅持。