免疫組化實驗的不順心是否讓你很苦惱，來看看恒遠(yuǎn)為你支招解決各種免疫組化的疑難雜癥！！

染色過強(qiáng)

原因	解決方法
抗體的濃度過高或抗體孵育時間過長	降低抗體滴度（一般指濃縮性抗體） 抗體孵育時間：室溫1小時或4℃過ye
孵育溫度過高，孵育溫度超過37℃	一般室溫20-28℃
DAB 顯色時間過長或 DAB 濃度過高	顯色時間不能超過5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)

非特異性背景染色

原因	解決方法
操作過程中沖洗不充分	每步?jīng)_洗3×5
組織中含過氧化物酶未阻斷	可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時間延長
組織中含內(nèi)源性生物素	正常非免疫動物血清再封閉
血清蛋白封閉不充分	延長血清蛋白封閉時間

染色弱

原因	解決方法
抗體濃度過低，孵育時間過短	提高抗體濃度，孵育時間不能少于60分鐘
試劑超過有效使用期	及時更換試劑
操作中，滴加試劑時緩沖液未瀝干，致使試劑稀釋	每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液（但防止切片干燥）
室溫太低，低于15℃	若室溫低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分鐘（或4℃冰箱過ye）
蛋白封閉過度	封閉時間不要超過10分鐘

染色陰性

原因	解決方法
操作步驟錯誤	重新試驗，設(shè)立陽性對照
組織中無抗原	設(shè)立陽性對照片，以驗證實驗結(jié)果
一抗與二抗種屬連接錯誤	仔細(xì)確定一抗與二抗種屬無誤

對實驗有任何問題和建議，對公司產(chǎn)品有任何疑問的，都咨詢或在線咨詢，上海恒遠(yuǎn)竭誠為您服務(wù)！