人抗呼吸道合胞病毒抗體（RSV）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用。
                                                                                                                                          96T
 
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗呼吸道合胞病毒抗體（RSV）表
達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人抗呼吸道合胞病毒抗體（RSV）表達(dá)。用純化的抗
體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中抗呼吸道合胞病毒抗體（RSV）相結(jié)合，經(jīng)洗
滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)
合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值） ，與 CUTOFF值
相比較，從而判定標(biāo)本中人抗呼吸道合胞病毒抗體（RSV）的存在與否。
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1瓶  8  陽(yáng)性對(duì)照  0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8條  9  陰性對(duì)照  0.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說(shuō)明書(shū)  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)
標(biāo)本要求  
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.  編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1
孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
 
 
2.  加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50µl。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測(cè)樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。   7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.  測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值） 。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
 
操作程序總結(jié)：
 
 
 
 
計(jì)算和結(jié)果判定：
    試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
    臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
    陰性判定：樣品 OD 值<  臨界值（CUT  OFF）者為抗呼吸道合胞病毒抗體（RSV）陰
性
    陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥  臨界值（CUT  OFF）者為抗呼吸道合胞病毒抗體（RSV）陽(yáng)
性 。  
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的liu酸，使用時(shí)必須
注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月