超氧陰離子試劑盒提取方法

測(cè)定意義：

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過(guò)多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

測(cè)定原理：

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)A530值可以計(jì)算樣品中O2－含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、lv仿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體8mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：lv仿，自備。

超氧陰離子提取

1. 植物、動(dòng)物組織：稱(chēng)取約0.1g樣本，加入提取液1mL，充分研磨，12000rpm，4℃，離心20min，取20μL上清測(cè)定蛋白含量，其余上清作為待測(cè)樣本。

2. 血清或培養(yǎng)液：直接測(cè)定。