親和沉淀

將親和反應的高度選擇性、低處理量特性與沉淀操作的大處理量、地選擇性有機結(jié)合形成了親和沉淀技術(shù)。將配基與可溶性載體偶聯(lián)后形成載體-配基復合物，該復合物與生物分子結(jié)合后在一定條件下可以沉淀出來。

配基-載體復合物可以選擇性地與蛋白質(zhì)結(jié)合，溶液中的pH值、離子強度及蛋白質(zhì)濃度等條件對親和結(jié)合的影響力并不大，只有競爭性的配基會降低產(chǎn)物與原配基的親和結(jié)合力，甚至使親和結(jié)合發(fā)生逆轉(zhuǎn)。

引導產(chǎn)生沉淀的方法有：離子交聯(lián)；加入帶相反電荷的聚合物；加入帶相反電荷的疏水基團；改變pH值，誘導產(chǎn)生疏水沉淀；溫度誘導產(chǎn)生沉淀。

親和結(jié)合：將親和配基加入到含有目的物蛋白質(zhì)的溶液中，調(diào)節(jié)好有關沉淀的條件，使之有利于親和結(jié)合。

洗滌：為經(jīng)過處理的粗制液中發(fā)生親和沉淀可能會發(fā)生非特異性結(jié)合，尤其是使用帶電的聚合物，離子交換的效應將使其他蛋白質(zhì)共同沉淀，因此在分離目的物之前要洗滌沉淀物。其做法是：加入適當?shù)那逑磩┲匦氯芙獬恋?，再沉淀；或在專一性洗脫之前?清洗沉淀。在上述過程中要始終保持目的蛋白質(zhì)與配基處于親和結(jié)合狀態(tài)。

配基-載體復合物與目的蛋白質(zhì)的分離：分離結(jié)束之后，要確?；厥漳康牡鞍踪|(zhì)和配基-載體復合物，目的蛋白質(zhì)要達到一定的純度，回收率要高。