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怎樣設(shè)定培養(yǎng)細胞離心機的離心力

閱讀:2729      發(fā)布時間:2013-4-18
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        離心機作為一種手段,具有許多優(yōu)點。例如,超速離心機可在低溫下操作,保護了生物大分子的活性。制備型的離心機負載量大,一次可分離提純幾克樣品,比層析、電泳上的樣品量大得多。分析離心機不僅可測物質(zhì)的分子量,還可檢驗物質(zhì)的純度、構(gòu)象、沉降系數(shù)等。因此離心技術(shù)在生物學研究中占有重要的地位,是分離、純化細胞、病毒、蛋白、核酸和酶的zui方便zui有效的工具。

離心機是借離心力分離液相非均一體系的設(shè)備。根據(jù)物質(zhì)的沉降系數(shù)、質(zhì)量、密度等的不同,應(yīng)用強大的離心力使物質(zhì)分離、濃縮和提純的方法稱為離心。一般說,離心機轉(zhuǎn)速在20 000r/min以上的稱為超速離心機。離心技術(shù),特別是超速離心技術(shù)是分子生物學、生物化學研究和工業(yè)生產(chǎn)中*的手段。

  用離心方法分離生物大分子和亞細胞物質(zhì)的基本原理是根據(jù)它們在液體介質(zhì)中或者沉降速度不同而形成不同的區(qū)帶,或者它們的密度不同而停留在液體介質(zhì)中不同的位置而把它們一一分開。前者是沉降速度法,應(yīng)用該法時液體介質(zhì)的zui大密度要小于樣品中zui小顆粒的密度,離心時選用高轉(zhuǎn)速和短時間;后者是沉降平衡法,應(yīng)用該法時液體介質(zhì)的zui大密度要大于樣品中zui小顆粒的密度,離心時選用較低轉(zhuǎn)速和較長時間。實際操作有幾種形式:

  1.差速離心 這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,zui后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開。

這種方法比較簡單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時間,這樣大小相近的顆粒也會沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。

  2.速度區(qū)帶(或速度梯度)離心 本法是將樣品放在一個連續(xù)的密度梯度液體上,通過離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經(jīng)過一段時間,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開。但對密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。

  蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度離心。再分別進行收集處于不同區(qū)帶里的各個組份。

 

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