上海源葉生物科技有限公司
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金葡菌毒素相關(guān)基因
2011-5-7 閱讀(1008)
金葡菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于三類毒力因子:產(chǎn)生的毒素、侵襲性酶和其他結(jié)構(gòu)成分。a.毒素:腸毒素(staphyloccoccla enterotoxin,SE)、,毒性休克綜合征毒素-l(toxic shock syndrome toxin 1,tsst-1)、表皮剝落毒素(exfoliative toxins,eta-b)、溶血毒素(staphylolysin)及殺白細(xì)胞素(1eukoeidin)等。L侵襲性酶:血漿凝固酶(coagulase)、耐熱脫氧核糖核酸酶(heat stable nuclease)、纖維蛋白溶解酶(fibrinolysin)、透明質(zhì)酸酶(hyalurouidase)等。c.其他:黏附素、莢膜、胞壁肽聚糖等。由于金葡菌的致病性主要與其產(chǎn)生的各種毒素有關(guān),因此關(guān)于各種毒素的基因檢測(cè)一直以來(lái)都是研究的熱點(diǎn)。
a.腸毒素基因。腸毒素是金葡菌產(chǎn)生的一種耐熱的外毒素,是其主要致病因素,有報(bào)告表明近50%的金葡菌菌株在實(shí)驗(yàn)室條件下能產(chǎn)生腸毒素,并且一個(gè)菌株能產(chǎn)生兩種或兩種以上的腸毒素,現(xiàn)已鑒定出的腸毒素有A型、B型、C1~C3型、D型、E型、G型、H型、I型、J型11種。一般來(lái)說(shuō),食物中毒時(shí)毒素A型、D型常見,B型、C型次之,涉及到E型毒素的發(fā)生率zui低,各腸毒素毒力不一,A型毒素毒力較強(qiáng),D型較弱。對(duì)腸毒素的檢測(cè)方法主要包括經(jīng)典的免疫學(xué)試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)等,當(dāng)然也有一些其他的現(xiàn)代方法,如向四海等通過(guò)表面等離子體技術(shù)檢測(cè)了腸毒素B。鑒于傳統(tǒng)方法的低靈敏性、低專一性, 目前的檢測(cè)手段已越來(lái)越趨向于分子生物學(xué)方法,針對(duì)特異性產(chǎn)毒素基因,如傳統(tǒng)的SEA、SEB、SEC、SED基因及新發(fā)現(xiàn)的腸毒素基因SEI、SEJ等進(jìn)行PCR及探針檢測(cè),這也是當(dāng)前分子生物學(xué)用于檢測(cè)致病性金葡菌zui常用的手段。多數(shù)產(chǎn)腸毒素的基因位于染色體上,且一般至少有兩個(gè)基因位點(diǎn);少數(shù)由質(zhì)??刂?,且通常與耐藥性基因處于相同質(zhì)粒中,如SED基因位于27.6kb的質(zhì)粒PIB485上,用EB消除PIB485時(shí),菌株的耐甲氧西林性狀隨之消失;SEB基因亦與青霉素抗性質(zhì)粒相關(guān),80%的青霉素抗性菌株可產(chǎn)生SEB。針對(duì)腸毒素不同基因的PCR檢測(cè)已有大量報(bào)道,這里不再贅述。
b.毒性休克綜合征毒素-1(toxicshock syndrome toxinl,tsst-1)。由噬菌體I群金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的一類蛋白質(zhì),可引起機(jī)體多個(gè)器官系統(tǒng)的功能紊亂或毒性休克綜合征(TSS)。zui早發(fā)現(xiàn)于1987年,稱為腸毒素F或熱源性外毒素(PEC),后統(tǒng)稱為TSST-1,該毒素在美國(guó)的病死率為13%。編碼TSST-1的基因位于染色體上,TSST-1的蛋白質(zhì)密碼序列長(zhǎng)度為585個(gè)堿基對(duì)(194個(gè)氨基酸),據(jù)此推測(cè)其相對(duì)分子質(zhì)量為22049。K.Becker等在對(duì)429株臨床分離金葡菌進(jìn)行的PCR-DEIA(PCR-DNA enzyme immunoassays)的檢測(cè)中,發(fā)現(xiàn)有約20%的菌株可擴(kuò)增出tsst-1基因。
c.表皮剝落毒素(exfoliative toxin,et)。由噬菌體Ⅱ型金葡菌產(chǎn)生的一種外毒素,分為A、B兩型,可引起人的葡萄球菌性燙傷樣皮膚綜合征(staphylococcus scalded skin syndrome,SSSS),常見于新生兒,病死率20%。其中eta為染色體編碼,etB基因則位于27X106u的質(zhì)粒上。K.Becker等在對(duì)429株臨床的分離金葡菌進(jìn)行的PCR-DEIA(PCR-DNAenzymeimrnunoassays)檢測(cè)中,成功擴(kuò)增出ec基因,同時(shí)表明只有少數(shù)菌株具有產(chǎn)該毒素能力;Y.Hayakawa等對(duì)臨床乳房炎金葡菌分離株的eta基因及其調(diào)控基因(accessorygeneregulator,agr)進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,發(fā)現(xiàn)其與人源分離株eta基因僅在ORF上游區(qū)存在三個(gè)堿基的差異;此外,盡管在32個(gè)位點(diǎn)存在差異,人源分離株etaORF上游120bp處的ORF 0-4)也在乳源菌株中被發(fā)現(xiàn),表現(xiàn)出了一定的保守性。