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上海源葉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： S30260異硫氰酸胍,30259鹽酸胍,嗜熱菌蛋白酶 |
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活細(xì)胞間接免疫熒光法
2012-6-2 閱讀(1229)
一．實(shí)驗(yàn)器材：
1． 器材：
40孔塑料板、40孔板離心機(jī)、微量加樣器、振蕩器、蓋玻片、熒光顯微鏡等。
2． 試劑：
單抗隆抗體（單抗）、熒光標(biāo)記抗鼠免疫球蛋白、PBS（pH7.2-7.4）、甘油、疊氮鈉（NaN3）等。
二．方法（微量法）
1． 將分離好的單個(gè)核細(xì)胞用PBS洗2次，1000rpm每次10分鐘。用含0.1% NaN3 PBS調(diào)細(xì)胞濃度在0.5-1×108/ml（5000萬-1億/ml），加在40孔板上，每孔10ul，含5-10×105細(xì)胞，然后加入單抗（*抗 體）50ul（同時(shí)加入AB型血清5ul）振蕩混勻，置4℃，至少30分鐘。
2． 用含0.1%NaN3的PBS洗一次，1000rpm離心3-5分鐘棄上清。
3． 加熒光標(biāo)記抗鼠抗體（第二抗體）工作液20ul，混勻振蕩置4℃/30分鐘（時(shí)間不能超過）。
4． 用含0.1%NaN3的PBS洗2次，方法同上，棄上清，加入含60%甘油的PBS5-10ul（依據(jù)所加細(xì)胞量而定）振蕩均勻，點(diǎn)片，并加蓋玻片。
如想次日看結(jié)果可在第三步后每孔加入1%多聚甲醛PBS每孔50ul，混勻置4℃過夜，次日離心棄上清按四步做法觀察結(jié)果（為膜熒光）。
