生物顯微鏡--激光掃描共聚焦顯微鏡概述

生物顯微鏡--激光掃描共聚焦顯微鏡概述

激光掃描共聚焦顯微鏡（laser sconningconfocal microscope,LSCM）在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的主要應(yīng)用是通過一種或多種熒光探針標(biāo)記后可對固定的組織或活體標(biāo)本進(jìn)行觀察研究。當(dāng)這些標(biāo)本用普通熒光光學(xué)顯微鏡觀察時(shí)，來自焦點(diǎn)以外的其他區(qū)域的熒光對結(jié)構(gòu)的分辨率干擾較大，尤其是標(biāo)本的厚度在2Pm以上時(shí)，其影響更為明顯（圖l—1）。共聚焦方法可排除“焦點(diǎn)以外”熒光的干擾使側(cè)向和軸向分辨率提高。LSCM的分辨率比普通寬視野光學(xué)顯微鏡的分辨率高（zui大理論分辨率為o．2μm），透射電子顯微鏡的分辨率可達(dá)到0．1nm。因此，略CM在這兩種zui常用的形態(tài)學(xué)技術(shù)間架起了橋梁。

生物顯微鏡--激光掃描共聚焦顯微鏡概述

    LSCM的成像方法與普通寬視野光學(xué)顯微鏡不同，在普通寬視野光學(xué)顯微鏡中，整個(gè)標(biāo)本全部都被水銀弧光燈或佩燈的光線照明．圖像可用肉眼直接觀察。而共聚焦通過1柬或多束聚焦的光線對標(biāo)本進(jìn)行掃描．使共聚焦顯微鏡獲得照明，光源通常為激光，以這種方式掃指標(biāo)本所得的圖緣稱為光學(xué)切片（面）。這種因像的采集方法是通過儀器進(jìn)行的一種無損傷性的方法，它使用光線而不是使用機(jī)械方式完成對標(biāo)本的切片。共聚焦方法適用于活細(xì)胞標(biāo)本的圖像采集，并以z掃描的方式自動完成三維（3D）數(shù)據(jù)的采集．改善多標(biāo)記標(biāo)本的圖像質(zhì)量。

LSCM在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用越來越廣泛，成為許多研究人員的儀器。但對于許多*次接觸15cM的初學(xué)者．可能會遇到許多問題，因此本書著重講述15cM在具體應(yīng)用時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)、使用技巧、適用范圍等。在生物學(xué)成份領(lǐng)域中有各種型號的共聚焦顯微鏡，結(jié)構(gòu)原理基本相同，本書所描述的各種操作步驟、樣品制備的方法基本部可在其他儀器使用。同時(shí)可通過其他技術(shù)獲得更好的光學(xué)切片，包括去眷積（deconvolution））技術(shù)和多光子成像技術(shù)。

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