文庫(kù)構(gòu)建流程：

1.       樣品QC

2.       從總RNA中分離mRNA（原始文庫(kù)將采用至少2 µg mRNA進(jìn)行構(gòu)建）

3.       以帶有NotI酶切位點(diǎn)的oligo（dT）Linker Primer為反轉(zhuǎn)錄引物，再在雙鏈cDNA片段的5’端加SalII adaptor

4.       NotI酶切、過(guò)柱去除小片段

5.       將合成的雙鏈cDNA與載體進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH10B感受態(tài)細(xì)胞

6.       cDNA文庫(kù)的QC：檢測(cè)庫(kù)容量（重組子克隆數(shù)目）；隨機(jī)挑取30個(gè)克隆子進(jìn)行PCR鑒定和雙向測(cè)序分析，檢測(cè)含插入片段的克隆子比例，檢測(cè)平均插入片段大小

客戶提供

        注明樣品的種屬，收集樣品后，應(yīng)將樣品立即置于干冰保持低溫運(yùn)輸。

我們提供

       含有文庫(kù)的甘油菌和質(zhì)量分析鑒定報(bào)告

質(zhì)量保證

      文庫(kù)含有至少4 x 10⁶個(gè)原始克隆

       樣品平均插入片斷保證大于1.0 kb

     有超過(guò)85%的載體含有插入片段