GLuc-ON™ 啟動(dòng)子克隆采用分泌型的Gaussia熒光素酶（GLuc）作為報(bào)告子，可在活細(xì)胞中對(duì)超過(guò)20,000種人源啟動(dòng)子進(jìn)行實(shí)時(shí)活性分析。

可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染的GLuc-ON™ 啟動(dòng)子克隆在GLuc報(bào)告基因上游插入一段1.2-1.5 kb的序列。這段插入序列與位于特異人源基因轉(zhuǎn)錄起始區(qū)上游大約1.5kb到下游200bp之間的5'序列*。由于這段模擬的順式作用元件存在于克隆的啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)，我們可以通過(guò)觀察熒光素酶的活性來(lái)研究人源細(xì)胞中啟動(dòng)子對(duì)基因的調(diào)節(jié)作用。

美國(guó)GeneCopoeia可提供已構(gòu)建好的GLuc-ON啟動(dòng)子克隆，同時(shí)可提供客戶(hù)定制構(gòu)建服務(wù)。我們既可以提供單報(bào)告基因載體系統(tǒng)，也可提供雙報(bào)告基因載體系統(tǒng)。單報(bào)告基因載體系統(tǒng)以Gluc或GFP作為啟動(dòng)子報(bào)告基因；雙報(bào)告基因載體系統(tǒng)以Gluc作為啟動(dòng)子報(bào)告基因，以分泌型堿性磷酸酶（SEAP）作為信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)參。

圖1. GLuc-ON™ 啟動(dòng)子克隆工作流程

優(yōu)勢(shì)

Gaussia 熒光素酶

GLuc-ON™啟動(dòng)子克隆采用經(jīng)過(guò)修飾的GLuc（mGLuc）作為報(bào)告基因，能產(chǎn)生強(qiáng)烈且穩(wěn)定的熒光信號(hào)，克服了人源野生型GLuc（wtGLuc）信號(hào)衰退快等缺點(diǎn)。

圖2. mGLuc （藍(lán)色） 和 wtGLuc （紅色）的信號(hào)穩(wěn)定性。左側(cè)：含有穩(wěn)定劑的分析緩沖液；右側(cè)：常規(guī)分析緩沖液。

雙報(bào)告系統(tǒng)

雙報(bào)告系統(tǒng)也適用于GLuc-ON™ 啟動(dòng)子克隆。分泌型堿性磷酸酶（SEAP）作為第二個(gè)報(bào)告子可作為內(nèi)參，也能對(duì)多樣本常規(guī)轉(zhuǎn)染進(jìn)行精確比較。

圖3. 啟動(dòng)子在H1B1B 和 HEK293T細(xì)胞中的活性分析。雙報(bào)告基因啟動(dòng)子克隆或?qū)φ找皇絻煞蒉D(zhuǎn)染進(jìn)兩種細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染24小時(shí)（（HEK293T）和48小時(shí)（H1B1B）后分析樣品。NEG（包含非啟動(dòng)子序列）和EMPTY（載體不含啟動(dòng)子）作為陰性對(duì)照。