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當(dāng)前位置:> 供求商機> miRNA前體表達(dá)克隆
利用這些miRNA表達(dá)克隆研究相應(yīng)基因或者蛋白的表達(dá)調(diào)節(jié)情況。配合采用熒光素酶報告基因的靶標(biāo)克隆,可以和miRNA表達(dá)克隆一起進(jìn)行miRNA功能篩選合確證,以及miRNA靶標(biāo)基因的篩選和確證的交互實驗。
復(fù)能基因同時也提供多套的人類基因組和小鼠基因組的全長基因ORF表達(dá)克隆。用于miRNA靶標(biāo)的對應(yīng)蛋白的功能互補實驗。由于這些ORF克隆不含3’-UTR,可以用于特種miRNA對內(nèi)源靶基因抑制后的拯救實驗,進(jìn)一步確證miRNA功能及靶標(biāo)基因。
復(fù)能基因采用基于貓免疫缺陷病的慢病毒系統(tǒng),構(gòu)建了miRNA前體表達(dá)克隆的載體骨架。RNA聚合酶III型的H1啟動子驅(qū)動轉(zhuǎn)錄前體miRNA的莖環(huán)前體(大約有150核苷酸長度)。 隨后通過RNAi的酶系加工生成成熟的miRNA。使得在同一載體的CMV啟動子的驅(qū)動下共表達(dá)報告基因eGFP,雙順反子下游的新霉素篩選基因也同時表達(dá)。可作為監(jiān)測miRNA表達(dá),轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)化的效率的參考標(biāo)準(zhǔn)。
RISC-miRNA復(fù)合體通過結(jié)合靶基因的mRNA的3’非編碼區(qū)(3’-UTR)成功地調(diào)節(jié)靶基因。1)表達(dá)水平和翻譯水平的抑制;2)mRNA的被切割,被降解和豐度的下降。
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