細(xì)胞傳代的一般方法

時間：2012-2-28閱讀：3770

細(xì)胞傳代的一般方法
開始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞（單層細(xì)胞，鏡檢適合）、培養(yǎng)液（MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液）、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1萬單位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。
用具：小方瓶（100m1）、克氏瓶、膠塞、吸管（10ml、1m1）、細(xì)胞吹打管（20 ml）（以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌）
C02孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱
操作步驟：鏡檢細(xì)胞，挑選生長狀態(tài)良好，細(xì)胞界限清晰，具有立體感，形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細(xì)胞。配制細(xì)胞培養(yǎng)液：按以下配比配制MEM-0.2%LH培養(yǎng)液100ml內(nèi)，加入滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。消化細(xì)胞；先用PBS洗液沖洗細(xì)胞表面1-2次，每次10m1，棄去洗液，向細(xì)胞瓶內(nèi)加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細(xì)胞瓶平放，使消化液*覆蓋細(xì)胞表面。至細(xì)胞*脫落到胰酶中。每瓶加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液吹打分散細(xì)胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶（100m1）中，再加入10m1細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝，然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。加塞，置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2～4天成片。（由細(xì)胞接種濃度決定）；填寫傳代記錄。

上海復(fù)祥生物科技有限公司

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