總糖含量試劑盒說明書 微量法

                                                            規(guī)格：100管/96樣

總糖含量試劑盒說明書

微量法

正式測定前請選擇2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)?？偺且部煞Q為碳水化合物，包括可溶性的單糖，二糖以及不溶性的淀粉，纖維素，幾丁質(zhì)等。

測定原理：

總糖酸水解為還原糖，在 NaOH 和丙三醇存在下，DNS 試劑與還原糖共熱后被還原成氨基

化合物，在過量的 NaOH 堿性溶液中呈桔紅色，在 540nm 處有最大吸收峰，以此測定樣品中的總糖含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、沸水浴、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 100mL×1 瓶 ，4℃保存；

試劑三：液體 5mL×1 瓶 ，4℃避光保存

標準品：粉劑×10mg支，4℃保存；臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解，制備 10mg/mL 葡萄糖標準液。

樣品中總糖的提?。?/font>

稱取約 0.1g 樣品，加入 1mL 試劑一，1.5mL 蒸餾水，勻漿，95℃水浴中加熱 30min，加入1mL 試劑二，混勻，用蒸餾水定容至 10mL，8000g 25℃離心 10min，取上清液待測。（注意稀釋，見注意事項）

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95度。

3、加樣表 ：

注意：如果ΔA大于3，需要將上清液用蒸餾水稀釋，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

總糖含量計算：

以 1、0.75、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0 mg/mL 葡萄糖標準溶液為橫坐標，ΔA 為縱坐標繪制標準曲線，得到線性回歸方程 y=kx+b，將ΔA´代入方程得到 x（mg/mL）；

1、按樣本鮮重計算

總糖含量(mg/g 鮮重)=x×稀釋倍數(shù)×V 提取÷W=10x÷W×T

V 提?。禾崛『篌w積，10 mL；W：樣品質(zhì)量，g；稀釋倍數(shù)：T。

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