9L/lacZ大鼠膠質肉瘤細胞傳代/復蘇技巧

9L/lacZ大鼠膠質肉瘤細胞

,9LlacZ

貨號：YJ-r037（種屬鑒定）

價格： 1500.0

規(guī)格： 1*10 ⁶

細胞介紹

9L/lacZ細胞株1989年從9L細胞株（大鼠硝基脲誘導的膠質瘤細胞株）發(fā)展而來。 用攜帶E. coli編碼beta-半乳糖苷酶lacZ基因和帶來G418抗性的Tn5新霉素基因BAG復制缺陷的逆轉錄病毒載體感染9L細胞株。 細胞在G418存在下培養(yǎng)14天，克隆，并檢測beta-半乳糖苷酶生成。 9L/lacZ產生高水平的酶，選擇其進行后續(xù)研究。 細胞持續(xù)表達lacZ報告基因產物，從E. coli衍生來的beta-半乳糖苷酶，從而可以通過組織切片的組織化學染色來鑒定單個腫瘤細胞。 同一片子上的淋巴細胞和其它響應細胞也可以通過雙標記抗體進行鑒定。 染色細胞和背景的對比有益于圖像分析。 這是少數(shù)允許量化分析的大腦微觀腫瘤模型中的一種。 這種腫瘤模仿了人類大腦腫瘤的生長和傳播的重要特性。 beta-半乳糖苷酶的表達十分穩(wěn)定，但細胞培養(yǎng)數(shù)月后應該重新進行克隆。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1) 準備：1640 基礎培養(yǎng)基(推薦：YJ-0002)，優(yōu)質胎牛血清10 %，P/S 1 %

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

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