LOVO+luc人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標記傳代/復(fù)蘇技巧

LOVO+luc人結(jié)直腸癌細胞熒光素酶標記

,LOVO luc

貨號：YJ-0079a（STR（lovo鑒定））

價格： 3200.0

規(guī)格： 1x10⁶

細胞介紹

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細胞特性

1） 來源：結(jié)直腸腺癌

2） 形態(tài)：上皮細胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10⁶細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。        

建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1) 準備：1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦：YJ-0002)，優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %，P/S 1 %

2) 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

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