傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場光源,標(biāo)本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾;激光顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點掃描,標(biāo)本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光點倍增管或冷電耦器件逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。
激光顯微鏡的特點:
1、對活細(xì)胞和組織或細(xì)胞切片進(jìn)行連續(xù)掃描,可獲得精細(xì)的細(xì)胞骨架、染色體、細(xì)胞器和細(xì)胞膜系統(tǒng)的三維圖像。
2、可以得到比普通熒光顯微鏡更高對比度、高解析度圖像、同時具有高靈度、杰出樣品保護(hù)。
3、多維圖像的獲得,時間序列掃描旋轉(zhuǎn)掃描、區(qū)域掃描、光譜掃描、同時方便進(jìn)行圖像處理。
4、細(xì)胞內(nèi)離子熒光標(biāo)記,單標(biāo)記或多標(biāo)記,檢測細(xì)胞內(nèi)如PH和鈉、鈣、鎂等離子濃度的比率測定及動態(tài)變化。
5、熒光標(biāo)記探頭標(biāo)記的活細(xì)胞或切片標(biāo)本的活細(xì)胞生物物質(zhì),膜標(biāo)記、免疫物質(zhì)、免疫反應(yīng)、受體或配體,核酸等觀察;可以在同一張樣品上進(jìn)行同時多重物質(zhì)標(biāo)記,同時觀察;
6、對細(xì)胞檢測無損傷、精確、準(zhǔn)確、可靠和優(yōu)良重復(fù)性;數(shù)據(jù)圖像可及時輸出或長期儲存。