電泳槽的使用方法及注意事項

所謂電泳，是指帶電粒子在電場中的運動，不同物質(zhì)由于所帶電荷及分子量的不同，因此在電場中運動速度不同，根據(jù)這一特征，應(yīng)用電泳法便可以對不同物質(zhì)進行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M行組份分析或單個組份提取制備，這在臨床檢驗或?qū)嶒炑芯恐芯哂袠O其重要的意義。電泳儀正是基于上述原理設(shè)計制造的。下面簡單介紹其使用方法及注意事項。
 使用方法
1． 首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。
2． 電泳儀電源開關(guān)調(diào)至關(guān)的位置，電壓旋鈕轉(zhuǎn)到較為小，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。
3． 接通電源，緩緩旋轉(zhuǎn)電壓調(diào)節(jié)鈕直到達(dá)到的所需電壓為止，設(shè)定電泳終止時間，此時電泳即開始進行。
4． 工作完畢后，應(yīng)將各旋鈕、開關(guān)旋至零位或關(guān)閉狀態(tài)，并撥出電泳插頭。
注意事項
1． 電泳儀通電進入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。
2． 儀器通電后，不要臨時增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。
3． 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時所通過的電流量也不同，其泳動速度及泳至終點所需時間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時在同一電泳儀上進行。
4． 在總電流不*過儀器額定電流時(較為大電流范圍)，可以多槽關(guān)聯(lián)使用，但要注意不能*載，否則容易影響儀器壽命。
5． 某些特殊情況下需檢查儀器電泳輸入情況時，允許在穩(wěn)壓狀態(tài)下空載開機，但在穩(wěn)流狀態(tài)下必須先接好負(fù)載再開機，否則電壓表指針將大幅度跳動，容易造成不必要的人為機器損壞。
6． 使用過程中發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進行檢修，以免發(fā)生意外事故。

夾芯式垂直電泳槽使用方法：
一、組成部件
(一)裝有鉑金絲的貯液槽一對，配有冷卻裝置及電泳緩沖液流出口。
(二)凹型橡膠框，配有玻璃板，可分別制作厚度為lmm、1.5mm的凝膠板，操作時根據(jù)需要選擇適當(dāng)厚度的玻璃板及梳子配套使用。
(三)樣品孔模具(梳子)用于電泳加樣。
(四)固定貯液槽的螺絲桿及螺母4對，28D、30型為5對。
(五)橡膠管五根。兩根長的用于連接冷卻水的出入口；中等長度的兩根用于連接電極緩；中液的流出口；較為短的一根用于連接貯液槽間的冷卻水。
(六)導(dǎo)線1付。二、使用方法
(一)清洗部件
上述部件組裝前要*清洗干凈。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框，必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑*清洗干凈。清洗后的玻璃板應(yīng)放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。
(二)組裝電泳槽
A、1、將四只固定螺桿插進一只貯液框(半上槽)的相應(yīng)孔洞中，然后將貯液框仰放在桌上。
2、左手拿凹型槽橡膠模框，右手的拇指與中指握住玻璃板的兩側(cè)邊緣插到橡膠模框內(nèi) (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板)。
3、將帶有玻璃的橡膠?？蜃臃旁谘龇诺馁A液槽框架上，其下緣必須對齊貯液槽框下緣。
4、雙手拿另一只貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合，并使橡膠框上的凸出線位于貯液槽有機玻璃框中央。
5、裝上四只螺母，擰緊螺絲。注意擰緊螺絲時用力應(yīng)均勻，用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊。
6、將電泳槽垂直豎起，放在桌上，帶短玻璃板的貯液槽稱上槽(陰)，帶長玻璃板的貯液槽稱為下槽(陽)，在長玻璃板與橡膠框間有一縫隙。此縫隙可用已熔化的10％瓊脂沿長玻璃板下端灌入，為防止留存氣泡，可稍抬起一端即可趕去氣泡。待瓊脂*凝固后才能灌膠。
B、也可將槽垂直豎起，將帶有玻璃的橡膠?？蛑苯臃湃氩壑校瑢ΨQ擰緊螺絲后，用瓊脂封底邊。
(三)灌膠
1、先灌分離膠，待凝固后再灌濃縮膠。灌膠前接通冷卻水，夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管。
2、用細(xì)頭滴管吸取膠液，沿長、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液。為防止產(chǎn)生氣泡，可稍拾起另一端(氣泡往高處走)，不斷加入膠液。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處，輕輕加少許水，雙手輕輕將梳子插入，待膠凝后就可形成凹形加樣孔。
3、為防止漏膠，在上、下貯液槽中立即加入蒸餾水，但蒸餾水不能*過短玻璃板上緣。
4、膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折
射率不同的亮區(qū)。
(四)加樣
1、松開連接上、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子，放掉槽內(nèi)的蒸餾水，待水流完后，再夾緊夾子。
2、雙手輕輕取出樣品梳子，即可看到界線清楚的加樣孔，將孔中水分吸去(注意千萬不要碰壞孔沿的字面)。
3、在上、下貯液槽中加入緩；中液，液體高度應(yīng)*過上貯液槽短玻璃板上緣。
4、用微量注射器吸取一定量的樣品加到長、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(nèi)(注意加樣動作要輕，針頭不能碰壞膠面)。
(五)電泳
一貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的負(fù)極相連，下貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的正極相連。檢查線路無誤，方可按照所要求的電壓電流進行電泳。
(六)取出膠板
電泳結(jié)束，旋松螺母，取出膠框，剝出玻璃板，在兩塊玻璃板下角空隙內(nèi)，用刀片背面輕輕撬動，即可將膠面與一塊玻璃板分開，將有膠板的玻璃板平放在桌上，雙手輕輕沿凝膠底將膠片托起，放在大培養(yǎng)皿中染色，膠板經(jīng)漂洗、脫色后即可看到清晰的分離條帶

常見問題及解決辦法：1、紋理和托尾現(xiàn)：由于樣品溶解不佳引起的，克服的方法可以在加樣前離心，增加一些增溶輔助試劑如尿素。
2、蛋白帶過寬，與鄰近泳道的蛋白帶相連時由于加樣量太多，可以減少上樣量。
3、電泳時間比正常要長。可能由于凝膠緩沖系統(tǒng)和電極緩沖系統(tǒng)的PH選擇錯誤，即緩沖系統(tǒng)的PH和被分離物質(zhì)的等電點差別太小，或緩沖系統(tǒng)的離子強度太高。
4、指示劑成微笑符號(指示劑前沿呈現(xiàn)向上的曲線形)，說明凝膠的不均勻冷卻，中間部分冷卻不好，導(dǎo)致分子有不同的遷移率所致。
5、指示劑成哭臉符號(指示劑前沿呈現(xiàn)向下的曲線形)，由于電泳槽的裝置不合適，尤其是凝膠和玻璃板組成的“三明治”底部有氣泡或靠近隔片的凝膠聚合不*。
6、凝膠時間不對。通常膠在60min，1H內(nèi)凝，如果凝的太慢，可能是TEMEN，APS劑量不夠或者失效。APS應(yīng)該現(xiàn)配現(xiàn)用，TEMED不穩(wěn)定，容易被氧化成黃色。如果凝的太快，可能是APS和TEMED用量過多，此時膠太硬易裂，電泳時易燒膠。