詳述分光光度計(jì)的具體分類及應(yīng)用
分光光度計(jì),又稱光譜儀,是將成分復(fù)雜的光,分解為光譜線的科學(xué)儀器。測(cè)量范圍一般包括波長(zhǎng)范圍為380~780 nm的可見光區(qū)和波長(zhǎng)范圍為200~380 nm的紫外光區(qū)。不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的380~780nm波長(zhǎng)的光譜光通過(guò)三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計(jì)的光源。
分光光度計(jì)是一種分析測(cè)量光譜的儀器,因?yàn)閼?yīng)用需求的不同,分光光度計(jì)有著不同的種類。分光光度計(jì)按照波長(zhǎng)及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為:
(1)可見光分光光度計(jì)
(2)紫外分光光度計(jì)
(3)紅外分光光度計(jì)
(4)熒光分光光度計(jì)
(5)原子吸收分光光度計(jì)。
現(xiàn)今生命科學(xué)領(lǐng)域比較流行的*微量分光光度計(jì)是屬于紫外分光光度計(jì)的一種。
(1)可見分光光度計(jì)
用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見光(400~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器,稱為可見分光光度計(jì)??稍?00nm測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
(2)紫外可見分光光度計(jì)
紫外可見分光光度計(jì)用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見光或紫外光(200~760nm)的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器。可以測(cè)定核酸和蛋白的濃度,也可以測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。紫外分光光度計(jì)又可分為單光束,假雙光束,雙光束。它們的用途又有區(qū)別。
a) 單光束:適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度,一般不能作全波段光譜掃描,要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。
b) 雙光束:自動(dòng)記錄,快速全波段掃描??上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響,特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜,價(jià)格較高。
c) 假雙光束也就是比例雙光束,它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束,一束直接到達(dá)檢測(cè)器,另一束通過(guò)樣品后到達(dá)另一個(gè)檢測(cè)器。這種儀器的優(yōu)點(diǎn)是可以監(jiān)測(cè)光源變化帶來(lái)的誤差,但是并不能消除參比造成的影響。
(3)紅外分光光度計(jì)
一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜,這是研究有機(jī)化合物較為常用的光譜區(qū)域,能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣。
紅外光譜法的特點(diǎn)是:快速、樣品量少(幾微克-幾毫克),特征性強(qiáng)(各種物質(zhì)有其特定的紅外光譜圖)、能分析各種狀態(tài)(氣、液、固)的試樣以及不破壞樣品。
(4)熒光分光光度計(jì)
熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。應(yīng)用于科研、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域。
通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
(5)原子吸收分光光度計(jì)
主要適用樣品中微量及痕量組分分析常規(guī)儀器之一。是材料分析及質(zhì)量控制部門進(jìn)行常量、微量金屬(半金屬)元素分析的有力工具。
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